透射电镜的使用方法|注意事项

　　透射电镜，全称透射电子显微镜，可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。透射电镜成像方式与光学生物显微镜相似，只是以电子透镜代替玻璃透镜。

透射电镜的使用方法

　　抽真空：接通透射电镜总电源，打开冷却水，接通抽真空开关，真空系统就自动的抽真空。一般经15～20min后，真空度即可达到10^-4~10^-5Torr，持高真空指示灯亮后，透射电镜即可开始使用。

　　加电子枪高压：接通透射电镜镜筒内的电源，给电子枪和透镜供电，由低至高速级给电子枪加高压，直至所需值。

　　更换样品：通常在透射电镜电子枪加高压而关断灯丝电源的条件下置换样品。取出样品时，首先打开过渡室和样品空间的空气锁紧阀门，向外拉样品杆，然后将过渡室放气，Z终拉出样品杆，从样品座中取出样品。换上所需观察的样品，必须将样品钢网牢固地突持在样品杆的样品座中，然后将样品杆插入过渡室，抽过渡室低真空并使其达到真空度要求，打开过渡室和样品空间的空气锁紧阀，将样品杆推进样品室。

　　加灯丝电流并使电子束对中：顺时针方向转动透射电镜灯丝电流钮，慢慢加大灯丝电流，注意电子束流表的指示和荧光屏亮度，当灯丝电流加大到一定值时，束流表的指示和荧光屏亮度不再增大，即达到灯丝电流饱和值。

　　图象观察：当束流调到所需值后，Z终推进样品杆，用样品平移传动装置把样品座调到观察位置，即可进行图象观察。首先在透射电镜低倍下观察，选择感兴趣的视场，并将其移到荧屏ZX，然后调节透射电镜中间镜电流确定放大倍数，调节透射电镜物镜电流使荧光屏上的图象聚焦至Z清晰。

　　照相记录：当荧光屏上的图象聚，焦至Z清晰时，便可进行照相记录。调节图象亮度和相应的暖个时间。当二者配匹得当(曝光表上绿灯亮时)，拉开曝光快门，将荧光屏翻起，让携带样品信息的电子束照射到胶片上使其感光，正常曝光时间以4～8s为宜。

　　停机：顺序地关断透射电镜灯丝电源、关断高压、镜筒内的电源、关断抽真空开关、约30min后关断总电源和冷却水。

透射电镜的特点

　　1、由于样品制备技术的限制，对大多数生物样品来说，透射电镜分辨率Zgao为2nm。

　　2、透射电镜图像的分辨能力不仅取决于透射电镜本身的分辨率，而且取决于样品结构的反差。

　　3、透射电镜所用的光源是电子波，波长在非可见光范围内无颜色反应，所形成的图像是黑白图像，要求图像必须具有一定的反差。

　　4、生物体组织和细胞成分主要有C/H/O/N等轻元素组成，它们的原子序数较低，电子散射能力弱，相互之间的差别又很小，透射电镜下的图像反差一般较低。

　　5、由于电子束的穿透能力较弱，样品必须制成超薄切片。

　　6、透射电镜观察面小，载网直接能够为3mm，超薄切片范围为0.3-0.8mm。

　　7、电子束的强烈照射，易损伤样品，发生变形、升华等，甚至被击穿破裂，可能使观察结构产生假象。

　　8、观察时透射电镜镜筒必须保持真空，为了保证样品在真空下不损伤，对样品要求应无水分。因此，不能观察活体的生物样本。

　　9、生物制样复杂，在步骤繁多的制样过程中，样品容易产生收缩、膨胀、破碎以及内含物丢失丢失等结构改变。

透射电镜的注意事项

　　1、透射电镜常开机，多使用，这样就能随时掌握透射电镜工作情况，随时注意观察图、光、声、真空、气压、电源的变化情况，及时调节，作好记录，时间长了肯定会积累很多经验。

　　2、注意空气湿度、电压要稳定、气体要清洁干燥、防止小样品掉入，尤其是细颗粒，粉末、防止碰撞。

　　3、监视透射电镜电子枪内的氟里昂是否降低，监视机透射电镜械泵里的油是否降低到水平线以下，空气压缩机时常放放气，循环水装置内的水要定期更换，保持室内湿度在40~70%，温度在15~25度。透射电镜的修理来说就要有较高的技术水平，一要有兴趣，二要有悟性，主要是实际动手能力，和高超的综合知识的灵活运用，同时还要靠经验的积累，Z好是学电子学的人，又有实际能力来管理透射电镜。

　　4、旋转泵用的真空油有条件Z好一年换一次油。油脏的快慢主要和实验室洁净程度、湿度有关。透射电镜不用Z好也开着，每天抽抽真空，隔一两天电路通通电，透射电镜Z好每周开两天，尤其是夏天。