液相色谱仪荧光检测器的原理及特点

　　荧光检测器是液相色谱仪常用的一种检测器。灵敏度在目前常用的液相色谱仪检测器中Zgao。它用于能激发荧光的化合物，极高灵敏度和良好选择性是它Zda的优点，因而在某些领域如药物和生化分析中起着不可替代的作用。

液相色谱仪荧光检测器的原理

　　液相色谱仪的荧光检测器是双光路固定波长荧光检测器的中压泵灯发出的连续光经过半反射半透镜被分成两束，再分别通过测量池和参比池。半反射半透镜将百分之十左右的激发光反射在参比池及相应的光电倍增管上。液相色谱仪参比池有利于消除流动相所发射的本底荧光以及外界的影响，参比光路也有利于消除光源波动的影响。百分之九十左右的激发光经过激发光滤光片分光后选择定波长的光线作为样品激发光。该光束经过透镜聚光在样品池内的组分受激后发出的荧光强度与样品浓度成正比，这就是荧光检测器定量的基础。为避免激发光的干扰而选取与激发光成直角方向的荧光，由第二透镜将其会聚到发射滤光片后再通过光电倍增管以及放大器至记录仪。

　　液相色谱仪荧光检测器的灵敏度要比紫外检测器要高一百倍，当要对痕量组分进行选择性检测时其是一种强有力的检测工具。但它的线性范围较窄不宜作为一般的液相色谱仪检测器来使用但可用于梯度洗脱。它测定中不能使用可熄灭YZ或吸收荧光的溶济作流动相。对不能直接产生荧光的物质要使用色谱柱后衍生技术但其操作比较复杂。液相色谱仪荧光检测器现已在临床医学检验、生物化工、环境监测、食品检验中获得广泛的应用。

液相色谱仪荧光检测器的优缺点

　　液相色谱仪荧光检测器的优点：

　　①灵敏度极高。液相色谱仪荧光检测器的灵敏度比紫外-可见光检测器的灵敏度约高两个数量级，Z小检测量可达10^(-13)g。这是因为在紫外吸收检测法中，被检测的信号A=lg(Io/I)，即当样品浓度很低时，检测器所检测的是两个较大信号Io及I的微小差别;而在荧光检测法中，被检测的是叠加在很小背景上的荧光强度。荧光检测器是Z灵敏的液相色谱检测器，特别适合于痕量分析。愈是常用的衡量检测器灵敏度的基准物质。另外，荧光检测器的灵敏度还可以用水的拉曼谱带的信噪比来衡量。

　　②良好的选择性。产生荧光的一个必要条件是该物质的分子具有能吸收激发光能量的吸收带，即物质分子具有一定的吸收结构;另外的条件是吸收了激发光能量之后的分子具有高的荧光效率。相对较少的分子具有大的足够检测的量子效率是荧光检测器高选择性的主要原因。在很多情况下，液相色谱仪荧光检测器的高选择性能够避免不发荧光的成分的干扰，成为荧光检测的独特优点。

　　③线性范围较宽。虽然比紫外吸收检测器窄，但对大多数痕量分析，该线性范围已足够宽。在分析物质浓度较大时，发射强度由于内滤效应可能随浓度增加而降低。

　　④受外界条件的影响较小。

　　⑤只要选作流动相的溶剂不会发射荧光，荧光检测器就能适用于梯度洗脱。

　　液相色谱仪荧光检测器的缺点：

　　①荧光检测器的高选择性优点在一些情况下，也是该检测器的缺点。因为不是所有的化合物在选择的条件下都能发生荧光，所以荧光检测器不属于通用型检测器，与紫外-可见光检测器相比，应用范围较窄。

　　②对通常发生在荧光测量中的一些干扰非常敏感，如背景荧光和猝灭效应等。虽然这些干扰在液相色谱仪分析中不经常遇到，但在进行定量分析时，有必要验证这些干扰是否存在，以及对样品测定的影响程度。尤其对某些物质，如卤素离子、重金属离子、氧分子及硝基化合物等，都应予以特别注意。