液相色谱仪维护保养

　　液相色谱仪的应用也比较广泛，深受很多实验工作者青睐，使用液相色谱仪的过程中可能会有一些问题，比如日常维护保养需要注意哪些地方等等。

液相色谱仪流动相的要求

　　是样品的组分在柱填料和流动相之间质量交换来达到分离的要求，所以实验室要求流动相需要举报下面几个特点。

　　1、纯度

　　流动相需要按照规定使用HPLC的试剂。使用的时候过滤去除里面的颗粒性杂质或者一些别的物质。如果溶剂里面杂质过多，会导致液相色谱仪色谱柱的寿命降低。

　　2、溶解度

　　样品的溶解度需要合适，不能过大或者过小。如果溶解的样品不好会导致柱头沉淀，不光是影响分离还会导致色谱柱使用寿命降低。

　　3、粘度

　　粘度要低(应<2cp)，高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。Z好选择沸点在100℃以下的流动相。

　　4、样品

　　样品必须易于回收，应选用挥发性溶剂。

　　5、流动相PH

　　采用液相色谱仪分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以YZ样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子YZ技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。

　　液相色谱仪分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

液相色谱仪泵的使用与维护

　　为了延长液相色谱仪泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：

　　1、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相Z好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜(0.2μm或0.45μm)等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒(或片)。输液泵的滤器应经常清洗或更换。

　　2、泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，Z终产生漏液。

　　3、输液泵的工作压力决不要超过规定的Zgao压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

液相色谱仪色谱柱的使用与维护

　　在液相色谱仪日常分离分析工作中，色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

　　1、柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。

　　2、如果液相色谱仪用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。

　　3、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

　　4、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。

　　5、如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。

　　6、一般说来液相色谱仪色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

　　7、选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

　　8、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

　　9、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在液相色谱仪进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。

　　10、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

　　11、液相色谱仪色谱柱在使用的时候，如果压力突然，可能是烧结滤片堵塞，这个时候应该考虑清洗滤片或者更换滤片。还有一种可能就是大分子进入了色谱柱里面，导致色谱柱柱头污染。如果柱效降低或者色谱峰变形，那么可能回事柱头塌陷或者死体积过大。

　　12、在液相色谱仪完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对液相色谱仪分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。