高效液相色谱仪的原理、特点及应用

　　高效液相色谱仪的应用范围日益扩展。由于它使用了非破坏性检测器，样品被分析后，在大多情况下，可除去流动相，实现对少量珍贵样品的回收，亦可用于样品的纯化制备。

高效液相色谱仪的原理

　　高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

Waters Alliance HPLC 高效液相色谱系统（点击图片查看产品详情）

高效液相色谱仪的类型

　　比较常见的是液固吸附色谱，液固色谱进行混合物分离，固定相是固体吸附剂，可以分为极性和非极性两大类。选用的溶剂与固定相互不相溶，选用的溶剂应有高纯度，以防引起柱性能的改变。选用的溶剂如果使用紫外吸收检测器，就不能选用有紫外吸收的溶剂;选用的溶剂应有足够溶解能力，以提高灵敏度。溶剂应具有低黏度和低沸点，避免使用毒性溶剂，以保证安全。

　　键合相色谱，使用极性键和固定性，属分配色谱。反键合相色谱使用极性较小的键合固定相，可用疏溶剂作用。按极性大小可分为非极性、弱极性、极性。正键合相色谱采用流动相，流主体成分为己烷或庚烷，反相键合相色谱主题为水。多用于分离各类极性化合物如染料、炸 药、多巴胺、氨基酸等，在生物化学、食品分析、环境污染分析、医药研究等多领域有很大的发展。

　　凝胶色谱，又称分子排阻色谱，按照分子大小进行分离。是一种多孔性的聚合材料，可分为两类：即凝胶过滤色谱法与凝胶渗透色谱法。是利用了分配定律。由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是固定液。分内色谱中，要求尽可能不与固定液互溶，能分离极性、非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现，分离的选择性可得到很好的控制。

高效液相色谱仪的特点

　　1、分离效能高

　　由于新型高效微粒固定相填料的使用，液相色谱填充柱的注销可达5×10^3～3×10^4块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱10^3块/m理论塔板数的柱效。

　　2、选择性高

　　由于液相色谱柱具有高柱效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性。因此，高效液相色谱仪不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体，并已在高LX的合成药物和升华药物的生产控制分析中发挥了重要作用。

　　3、检测灵敏度高

　　在高效液相色谱仪中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如被广泛使用的紫外吸收检测器，Z小检出量可达10^-9g，用于痕量分析的荧光检测器，Z小检出量可达10^-12g。

　　4、分析速度快

　　由于高压输液泵的使用，相对于经典液相色谱，其分析时间大大缩短，当输液压力增加时，流动相流速会加快，完成一个样品的分析时间仅需几分钟到几十分钟。

高效液相色谱仪的用途

　　1、环境分析中的应用：可应用于环芳烃、农药残留分析等。

　　2、食品分析中的应用：可应用于食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析等。

　　3、生命科学中的应用：可在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学及生化领域的分子量物质纯化、分离和测定等。

　　4、医学检验中的应用：体液中代谢物测定、药代动力学研究、临床药物监测等的分析测定。

　　5、无机分析中的应用：阴、阳离子的分析等。

高效液相色谱仪与经典液相色谱仪的区别

　　经典液相色谱仪：

　　经典液相色谱仪使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。

　　高效液相色谱仪：

　　高效液相色谱仪使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。