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紫外可见分光光度计检定规程适用于新制造、使用中和修理后的波长范围为190~850nm或以上述区域为主要谱区的单光束紫外可见分光光度计进行检定,以保证其测试结果准确可靠。
根据实践经验,为快速可靠地检定紫外可见分光光度计,可按以下程序进行检定:
外观→绝缘电阻→稳定度→电源电压影响→基线平直度→噪声→波长准确度与重复性→灵敏度、Z小光谱通带→吸收池配套性→杂散辐射率→透射比准确度与透射比重复性
先将紫外可见分光光度计预热20min,在通电预热的同时,可进行外观检查。必须注意,波长准确度与波长重复性的检定,一定要在仪器稳定度合格的条件下进行,接着可进行灵敏度或Z小光谱带宽的检定。
当用标准溶液对透射比准确度与透射比重复性以及杂散辐射率进行检定前,需对吸收池配套性进行检定,因为吸收池不配套就将给透射比正确度的检定带来误差,所以这种顺序Z好不要倒置。当然也有的计量部门用自己的洗后吃给用户检定仪器,这样做的结果检定误差较小,但与实际使用情况有所脱节。所以应该将用户的吸收池检定后,误差大的一只装空白溶液,其余装待测溶液,这样检定的透射比准确度与透射比重复性才准确可靠,对用户使用紫外可见分光光度计也更具有实际意义。
紫外可见分光光度计具体检定过程如下:
1、外观及初步检查
紫外可见分光光度计各调节器应调节自如。钨灯和氘灯应能正常启辉,仪器的波长度盘置于580nm处,在样品室内应能观察到光亮均匀、边缘均匀的黄色光斑,光斑的亮度应随狭缝宽度的增大而增强。
2、波长准确度与波长重复性的检定
首先开启氘灯,将光源选择开关转到氘灯位置,量程选择开关调至0~1**%T,灵敏度开关转向低(LOW)位置,波长调至486.00nm谱线。
调节调零旋钮,使数字表显示0000.0,关闭样品室盖,调节光亮旋钮,使数字表显示050.0。调节波长旋钮,从短波方向缓慢转动到486.00nm附近,观察数字表显示Zda值时的波长,重复三次。
然后关闭氘灯,开启钨灯,用标准镨钕滤光片的529.8nm和807.7nm的吸收峰做参考波长,再次测量波长准确度。接着关闭氘灯和钨灯,打开光源室盖,设法将汞灯的窗口对准光源入射孔,临时固定好。
Z后开启汞灯光源,预热至发光稳定,即可对波长进行检定。如数字表显示很小的数字,则说明石英汞灯光亮不够,应重新对准。确实对准后,数字表的数字值若仍然很小,应提高紫外可见分光光度计的灵敏度,即将灵敏度开关拨向“HIGH”(高)位置。
3、灵敏度
将棱镜式紫外可见分光光度计波长分别置于200.0nm、625nm处,调节暗电流为零后,打开光门,调节狭缝宽度,使透射比示值为1**%,读取相应的狭缝宽度。
Z小光谱带宽光栅型紫外可见分光光度计用汞灯435.83nm或仪器固有的氘灯的特征谱线,如656.1nm(656.3nm)。该仪器为自动扫描式仪器,可直接扫描谱图,也可手动操作,将仪器波长度盘由短波向长波方向移动,记录ZX波长两侧透射比值下降50%时的波长读书λ之差,即为紫外可见分光光度计实际光谱带宽。
4、10mm石英吸收池配套检定
取两只清洗干净的吸收池,外边用干净的绸布擦干,内装蒸馏水,放入比色槽中(吸收池的箭头指向光电管方向)。波长调至220nm光源,关闭样品室盖,调节光量旋钮置000.0,拉出一档,使另一只吸收池对准光轴,记下数字表读数,两只吸收池透射比之差若小于0.2%,则可视为一套。
5、透射比准确度与透射比重复性
用透射比标称值分别为10%、20%、30%的光谱中性滤光片,分别在440、546、635nm处,以空气为参比,分开测量各滤光片的透射比。
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