膜片钳使用的注意事项

工作原理

工作原理膜片钳是一种能够直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。它的基本原理是以一个光洁，直径约为0.5~3um的玻璃微电极同神经或肌细胞的膜接触，之后对微电极另一端开口处施加适当的负压用电极的纤细开口将与电极接触的那一小片膜轻度吸入，如此在微电极开口处的玻璃边沿以及这一小片膜周边会形成紧密的封接，它的电阻能够达到数个或数十个千兆欧，这世界上就是在化学上完全隔离了吸附在微电极开口处的那一片膜同膜的其余部分，通过微电极记录到的电流变化仅仅和该膜片中通道分子的功能状态相关联。若在这一小片膜中仅仅有一个或少数几个通道蛋白分子，那么通过微电极测量出的电流，就是某种带电离子经由开放的单一通道蛋白质分子进行跨膜移动的结果。

操作步骤：

1.打开总电源。

2.依次打开电脑、显微镜、监视器、微操、放大器。

3.打开PULSE软件，在E盘建立自己的文件夹。

4.灌注玻璃电极并排空气体。

5.装上玻璃电极，浸入液面并调至视野范围。

6.点击set-up，将增益调为0.5，点Auto，记录电极电阻。

7.封接细胞，若上G，提起或吸破细胞。

8.依次点击on-cell，whole-cell补偿。

9.选定In-out或whole-cell模式进行实验。

10.用完关闭仪器，并切断总电源。

注意事项：

1.为了防止尘埃、静电伤害机器，每天做实验前请用清水拖地。

2.拉制仪使用前需预热15-30min。

3.银丝电极及地线发白时，请先用砂纸轻微打磨，再浸入新鲜的次氯酸钠溶液镀氯化银，如果银丝电极30min未变黑，则考虑更换次氯酸钠。

4.先开放大器，后开软件；先关软件，后关放大器。

5.非必须用到汞灯时请不要打开汞灯电源，打开后至少需1个小时才可关闭。

6.在放大器打开时不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝（包括地线），在取放细胞片时请关闭放大器。

7.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多（1cm左右为适），以防液体进入银丝底部增加噪声。

8.安装玻璃微电极时，电极应与银丝平行，防止刮蹭银丝电极。

9.玻璃微电极需先用甲醇浸泡，再用酒精灯微烧两端，使其平滑。

10.换液时应时刻观察浴槽，防止液面过低或液体溢出污染镜头，Z适液面为微高于出液口。

11.浴槽及灌流系统用毕请及时清洗，防止长菌影响实验。

12.打雷天气必须禁止膜片钳实验。

13.干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。

14.每位实验者请在E盘建立自己的文件夹储存数据。

15.实验者可以根据需求设定自己的电极拉制和patch模式参数，但请大家不要随意修改软件、显微镜以及拉制仪的默认设置。