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1976年德国马普生物物理研究所Neher和Sakmann创建了膜片钳技术(patch clamp recording technique)。这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动的技术。它和基因克隆技术(gene cloning)并架齐驱,给生命科学研究带来了巨大的前进动力。下面就让小编带你了解一下膜片钳和其他技术结合应用以及膜片钳实验中常见术语
膜片钳和其他技术结合应用
一、分析单一神经元离子通道表达的体外扩增
这是分子生物学技术和膜片钳技术结合的一个例子。采用全细胞模式,使用直径稍大一点的电极以便抽取单个神经元的胞浆内容。抽吸出来的胞浆在PCR后进行基因的分析,DNA的重组,然后与离子通道的功能和结构相结合,使得膜片钳在生命科学领域的应用范围极大地拓展了。
二、应用膜片钳和钙图像技术来测定单一活细胞的钙浓度
使用膜片钳微电极往细胞内注入指示剂染料,然后使用共聚焦激光扫描显微镜搭配高灵敏度的CCD(charge-couple device)图像记录系统,能够对钙的动态参数进行分析处理和快速测定。这些年来,此技术在耳鼻喉研究领域的到了广泛的应用。
膜片钳实验中常见术语
1.吉欧封接
吉欧封接(gigant seal)指的是玻璃微电极和细胞的表面接触紧密,在电学上与细胞膜的其它部分分离。
2.破膜
破膜(rupture)指的是在吉欧封接后,施加一个很小的负压,使得细胞膜破裂,从而形成全细胞模式。
3.run-down
在全细胞模式破膜后,在负压的作用下,细胞浆进入到微电极中,细胞很快的萎缩,能够维持1小时左右的全细胞模式。
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