大肠杆菌的培养步骤和注意事项

在1885年，Escherich发现了大肠杆菌，起初，大肠杆菌被认为是非致病菌，一直作为正常肠道菌群的组成部分被看待。直到20世纪中叶，人们才了解一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性。下面就让小编带你了解一下大肠杆菌是如何培养的。

一、配置培养基和灭菌

将50毫升LB液体培养基（LB液体培养基用于细菌的扩大培养）与刚配好尚未凝固的50毫升LB固体培养基（LB固体培养基用于细菌的划线分离）分别置入两个250毫升的三角瓶中，加上封口膜（既通气又不让细菌进入），用牛皮纸包好后高压锅灭菌15分钟。

二、倒平板操作

1.在火焰旁的桌面上放上灭过菌的培养皿，右手持着装有培养基的锥形瓶，用左手拔出棉塞。

2.将瓶口快速地通过火焰。

3.将培养皿用左手的拇指和食指打开一条稍大于瓶口的缝隙，用右手往培养皿中导入约为10-20毫升的培养基，然后立即用皿盖将培养皿盖上。

4.等待大约5-10分钟后，平板冷却凝固，倒置平板，让皿底朝上，皿盖向下。

上述操作的注意事项

1.倒平板操作需要在培养基灭菌并且冷却到60摄氏度左右才能进行。

2.消毒和灭菌：用酒精棉球对人手以及桌面进行消毒，无菌操作台通过超净紫外灯和过滤风灭菌。

3.在操作时，封口膜使用右手无名指和小指夹住，三角瓶用其他三指拿着，使用左手持着培养皿并且将上盖的一边打开，在酒精灯火焰旁操作。

4.必须将锥形瓶的瓶口通过火焰，从而灼烧灭菌。

5.为了避免皿盖上的水珠落入培养基，引起污染，必须在平板冷却凝固后将其倒过来放置。如果培养皿中已经形成菌落，那么形成单菌落就很困难了，分离的目的也就很难达成了。

三、扩大培养大肠杆菌

向灭菌后的液体培养基中接种斜面上培养的大肠杆菌菌种，将其在37摄氏度的摇床上培养12h。

大肠杆菌扩大培养的注意事项

1.在火焰的旁边用接种环从斜面上获取大肠杆菌。

2.在获取大肠杆菌之前，需要用酒精灯对接种环进行灼烧灭菌并且在接种环冷却后才能够获取大肠杆菌。

3.在获取大肠杆菌后，复原棉塞和封口膜。