培养基分装仪配制固体培养基操作规程

为微生物、植物和动物组织生长和维持提供的人工配制的养料，被称为培养基（Medium）。培养基（Medium）通常包括生长因子（维生素、氨基酸、碱基、KJ素、色素、激素和血清等）、无机盐（包括微量元素）、碳源、水、氮源。培养基不仅是细胞生长和繁殖的生存环境，而且还是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质。

一、制定本操作规程的目的

（1）使培养的质量有所提高，避免导致差错。

（2）使工作效率得以提高，可以节约时间和能源，使配制过程井然有序。

二、配置固体培养基操作规程

1.对培养基成分单进行填写

根据所用培养基配方及其配制量，将各种成分母液及琼脂、蔗糖的用量准确计算出来，然后依照大、微、铁、有、调、琼、糖、pH的顺序，在“配制培养基成分单”上填写。

2.将水锅加热

将约为欲配培养基量的70-80%的蒸馏水或软化水（澄清后的凉开水）加进做培养基专用的不锈钢锅内，然后将不锈钢锅放在电炉上加热。

3.向高压锅加水

将高压锅排水阀关闭，向锅内加软化水到安全水位线位置。

4.对琼脂、蔗糖进行称取

在称取之前，将干胶条状琼脂剪碎，破碎蔗糖结块，称量的精度必须高于1%。

5.摆放培养瓶

根据按预定分装瓶数，在桌上摆放洗净、晾（烘）干的培养瓶并保持其整齐。

6.对母液进行量取和混溶

根据培养基成分单所列顺序把贮存各种所需母液的试剂瓶摆放整齐，再根据配方用量顺序对各成分母液进行量取，并且，在烧杯中混溶。

7.将琼脂将加进水锅

加热到水锅的温度在90摄氏度左右，向水锅内加入称量好的琼脂，继续加热，不断匀速搅拌，防止糊锅。

8.将蔗糖加入

等到琼脂完全溶化，将蔗糖撒入，不停地搅拌。

9.将母液混溶液加入

在蔗糖溶化后，停止加热，一边搅拌，一边将母液混溶液慢慢倒入。

10.加水定容

将蒸馏水（或软化水）加入一直到欲配培养基量的锅壁标记。

11.对pH值进行调节

使用精密的pH试纸进行测定，然后对比比色卡，如果偏酸性，则将1mol/L的NaOH液滴入，若偏碱则将1mol/L的HCl液滴入，少量多次滴加，一直到满足要求为止。

12.对培养基进行分装

在摆好的培养瓶内分别均匀分装不同组培目的所需的每瓶培养基用量，然后将消毒好的棉塞或封口膜盖在瓶口上。

13.使用高压锅进行加热

将进水口及放气阀关闭，将排气阀打开，通电加热。

14.培养基（瓶）封口

使用牛皮纸（或直接用封口膜）加盖在棉塞上，并且使用棉线扎紧封口。

15.培养基（瓶）装锅

瓶口向上，略向ZX倾斜，瓶口不可贴于锅壁（防止冷凝水进入瓶内）。码放均匀，上方加盖三层牛皮纸吸湿，装锅不可过满，以加盖后不堵塞安全阀和放气阀的孔口为度。

16.将高压锅封盖，灭菌

封盖时应当顺时针方向将螺栓拧紧固定。在高压灭菌锅控制面板上选择温度121℃，时间为20分钟，将确认键按下，灭菌。

17.培养基（瓶）出锅

当灭菌结束后，高压灭菌锅自动断电，将锅盖打开，将培养基取出。

18.存放培养基

在接种室的存放架上整齐平放出锅的培养基（瓶），并且对于其培养对象（种类、品种）、培养目的（诱导、继代、生根）或其它特定用途以及配制日期明确标示。

19.高压锅排水

将排水阀打开，将锅内存水放尽，从而使积垢减少。