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按照DNA变性,复性原理设计出了DNA的PCR扩增,DNA的变性,复性原理如下,就让小编带你了解一下吧。


变性

核酸双螺旋碱基对的氢键断裂,双链变为单链,从而改变了核酸的天然构造和性质。变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂,破坏了碱基间的堆积力,然而一级结构的改变没有被涉及。如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等所有能破坏双螺旋稳定性的因素都能够造成核酸分子变性。


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变性DNA的一些理化及生物学性质常常发生改变:

1)增色效应(hyperchromic effect)

变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应,被称为增色效应(hyperchromic effect)。DNA分子由于DNA分子中碱基间电子的相互作用而具有了吸收260nm波长紫外光的特性。在DNA双螺旋结构中,碱基藏于内侧,变性时,DNA双螺旋解开,于是碱基外露,碱基中电子的相互作用对紫外吸收很有帮助,所以产生增色效应。


2)溶液旋光性发生改变。

变性后,改变了DNA分子局部的构造和对称性,从而使DNA溶液的旋光性发生变化。 


3)溶液粘度降低。

DNA双螺旋是紧密的刚性结构,变性后变成了柔软而松散的无规则单股线性结构,所以DNA粘度明显地下降了。


复性

在适当条件下,指变性DNA二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"(annea领)。温度以及DNA自身特性等其它因素都会对DNA的复性产生影响。

当变性DNA溶液温度低于Tm时,维持25℃的温度较长的一段时间,吸光率会逐渐降低。维持在Tm以下较高温度,更有利于复性。降温时间太短以及温差大均不利于复性。


2005-06-14 浏览次数:872次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_3604.html
热门标签: 传统定量PCR方法Real-Time PCR引物设计原则及其应用
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