Real-Time PCR引物设计原则及其应用

Real-Time PCR 技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，Z后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。下面就让小编带你了解一下Real-Time PCR引物设计原则及其应用。

Real-Time PCR引物设计原则

1.避免碱基重复，特别是G。

2.引物的退火温度一般在58-60摄氏度之间。

3.G+C含量为30％-80％。

4.不能有超过两个的G或C位于3′端Z后的5个碱基内。

5.引物的产物的大小通常在80-250bp之间，Z合适的产物大小为80-150bp。

6.尤其要对于引物二聚体以及非特异性扩增的存在注意避免。

7.Real-Time PCR引物的扩增产物应该跨外显子，引物能够跨外显子Z好，从而对基因组DNA污染影响加以避免。

Real-Time PCR在优生优育中的应用

随着经济的迅速发展以及人民生活水平的提高，人民越来越重视自己，家人尤其是下一代的身体健康，除此以外，因为国内计划生育，有很多的独生子女，所以长辈们更加的关注孩子的身体素质。如何使得新生儿质量提高呢？优生优育变得极其重要。

①防止有严重遗传性疾病和先天性疾病的个体出生。

②增进体力、智力个体的繁衍。

优生优育Z基本的内容是避免有严重遗传性疾病及先天性疾病个体出生。在母亲妊娠期间需要对母亲及胎儿进行遗传学检查，使得常见的遗传性疾病个体的出生尽可能排除。除此之外，在母亲妊娠期间对母亲是否患有某些易引起胎儿畸形的传染性疾病如弓型虫、风疹病毒、衣原体等感染进行检查。染色体分析法是从前进行遗传性疾病的检测的主要方法，但是临床上基因病才是绝大部分遗传性疾病，染色体发析法不能够检测出来。单个基因的突变使用PCR基因扩增法联合单链构型多态性分析（sscp）、限制性片段长度多态性分析（RFCP）等位基因特异性寡核某酸（Aso）点杂交或差异PCR很方便地检测出来，而且有超过95%的准确率。从前对容易导致胎儿畸形的感染性疾病原体的诊断非常困难。如今PCR基因扩增法具有很高的高敏感性和高特异性，对这些疾病诊断及LX跟踪非常适用，这种方法也非常值得推荐。