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PCR实验实验室布局

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临床基因扩增实验又被叫做PCR实验,是专门用来对艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测方法。它能够通过扩增病毒体内所含的基因的方法,将含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒检测出来。因为这种该检测方法能够将普通检验难以检测出的病毒检测出来并且其灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低,所以受到了临床医生的广泛认可,已经在对医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断广泛的应用。但是这种实验对实验环境和实验人员的要求很高,需要确保实验室安全、配置合理以及实验人员操作非常规范。


这些年以来,人们越来越重视临床基因扩增检验实验室的建设,因为它是检测结果的可靠性、准确性和安全性的关键因素。下面就让小编带你来具体的了解一下。


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实验布局

原则上,临床基因扩增检验实验室被分为试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区四个单独的工作区域。必须严格遵守由单一方向进入各个工作区域,就是只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区,以防止交叉污染。应该通过传递窗传递各实验区之间的试剂及样品。


通风压力控制

PCR实验室的净化要求不是很严格,然而应当采用全送全排的气流组织形式以降低各个实验区域间交叉污染的可能性。与此同时,为了保证各实验区的压力要求,要严格控制送、排风的比例。


试剂贮存和准备区

贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备为该实验区主要的操作。试剂和用于标本制作的材料不得经过其他区域,应直接运送至该区。必须在本区内贮存试剂原材料,并且将所需的贮存试剂在本区内制备成。本区对与气流压力的控制不作严格的要求。


标本制备区

临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成主要是本区域要进行的操作。为了防止从邻近区进入本区的气溶胶污染,本区的压力梯度要求为相对于邻近区域为正压。除此以外,因为气溶胶污染可能在加样操作中发生,因此在本区内Z好不要有不必要的走动。


扩增反应混合物配制和扩增区

DNA或cDNA扩增是本区域进行的主要操作。除此之外,也会在本区内进行已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等。在巢式PCR测定中一般必须在diyi轮扩增后打开反应管,所以,巢式扩增有较高的污染危险性,必须在在本区内进行第二次加样,为了防止气溶胶从本区漏出,本区的压力梯度要求为。相对于邻近区域为负压。应当对本区内的不必要的走动尽量减少,以防止气溶胶所致的污染。避免气溶胶所致的污染个别操作。


扩增产物分析区

扩增片段的测定为该区域主要进行的操作。若使用全自动封闭分析仪器检测,可不设此区域。Z主要的扩增产物污染来源于本区。所以,为了防止扩增产物从本区扩散至其它区域,对本区的压力梯度的要求为相对于邻近区域为负压。


2005-06-17 浏览次数:936次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_3611.html
热门标签: PCR仪的发展、使用和保养Real-Time PCR引物设计原则及其应用
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