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模块升温和降温时间、模块与PCR管内温度平衡时间、延伸时间以及循环次数这四个因素决定了在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间。
1、延伸时间
PCR产物的长度和DNA聚合酶的合成速度会对延伸时间产生影响。若PCR产物长度不足100bp时,则可以考虑将延伸时间变为0。常用的方法还有采用高速的DNA聚合酶,但是,高速的DNA聚合酶并不是对所有PCR实验都适用。
2、循环次数
模板量及检测要求会对循环次数产生影响。整合高速DNA聚合酶、超薄管(或特殊贴附技术)以及快速PCR仪使得CR反应在较短的时间内完成,就是快速PCR技术
3、模块升温和降温度时间
升降温速度通常会在PCR仪上被标明,然而,大多数PCR仪标的是Zda变温速度,即是瞬间达到的速度。仅有很少的PCR仪标的是和实验相关的平均升降温速度
4.模块与PCR管内温度平衡时间
由于铝块的导热能力要强于塑料和水许多,所以当模块温度达到后,PCR管内的温度还远没有达到,使二者达到平衡需要一定的时间。想要使这一时间减少,有以下四种方法:
(1)使模块温度过冲,在管内温度快达到时降到目标温度,然而如果过冲的温度太高会导致实际温度过冲,会对PCR反应结果产生影响。
(2)使PCR反应液的体积减少,然而若体积变小则会降低PCR反应的可靠性。
(3)使PCR管的厚度降低,然而若太薄则强度不够。
(4)使PCR管与模块贴附程度增加。
06-19
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