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提取得到DNA分子以后,其数量和质量需要通过电泳技术来检测。自从在核酸研究中引入琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶以来,根据相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术,已经发展成为一种对DNA分子分析鉴定的重要实验手段。基因操作的核心技术之一就是琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳。对于DNA片段的分离、鉴定和纯化,可以使用它们。该技术操作简单,速度快,DNA重组、DNA核苷酸序列分析、DNA限制性内切酶分析及限制性酶切作图等的技术以它们为基础。它们已经是许多通用的分子生物学研究方法。
凝胶电泳的显色
利用荧光染料溴化乙锭进行染色是观察凝胶中DNA的Z简便、Z常用的方法。溴化乙锭是一种核酸染料,其具有扁平分子,在高离子强度下,大概每2.5个碱基就会有一个溴化乙锭分子插入。在DNA溴化乙锭复合物中,染料接收DNA吸收的254nm处的紫外辐射,再和染料分子本身吸收302nm和399nm的光辐射结合,所以可在可见光谱红橙区的590nm处将吸收的能量重新发射出来。
所以对核酸分子染色之后,在紫外光下观察电泳标本,便能够将凝胶介质中DNA的谱带部位十分敏感而方便地检测出来,甚至能够清晰地显现出每条DNA带中含有的微量DNA。在适当的染色条件下,DNA片段的数量越多,荧光的强度越大。在包含有几种DNA片段的电泳谱带中,每一条带的荧光强度是在Zda的DNA片段到Z小的DNA片段方向慢慢减弱的。
凝胶电泳的分辨能力
凝胶的类型和浓度对于凝胶的分辨能力会有影响。0.2~50kb为琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围,聚丙烯酰胺凝胶有更加高的分辨能力,能够将较小分子质量的DNA片段分辨出来,1~1000bp为其分辨范围。凝胶介质孔隙的大小受到凝胶浓度的高低影响。浓度越高,孔隙越小,其拥有更强的分辨率。反之浓度降低,孔隙就增大,其拥有更弱的分辨率。
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