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利用在电场作用下带电粒子向极性相反的电极方向移动的现象来实现多组分物质分离、分析的仪器设备,称为电泳仪。
常用方法
1.等速电泳
等速电泳(Isotachophoresis,ITP)采用两种不同浓度的电解质,一种是前导电解质,在整个毛细管柱充满,另一种是尾随电解质,放入一端的电泳槽中。和所有样品组分相比,前导电解质的迁移率要更加的高,而尾随电解质的迁移率则比所有样品组分更低,被分离的组分根据其不同的迁移率夹在中间,在强电场的作用下,各被分离组分移动于前导电解质与尾随电解质之间的空隙中,从而使得分离实现。
2.双向凝胶电泳
双向凝胶电泳又叫做二维凝胶电泳,主要在对混合的蛋白质组分分离和分析时使用,对于其能够连续地将数千种蛋白质分离,比其他方法更具有优势。
该方法diyi向采用等电聚焦,以复杂的蛋白质成分中各个蛋白质等电点差异为依据分离蛋白质,第二向采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据蛋白质分子量的大小使其在垂直方向从而分离,结果呈现斑点状。
3.免疫电泳
结合琼脂平板电泳和双向免疫扩散两种方法,为免疫电泳(Immunoelectrophoresis),首先在琼脂平板上对抗原样本进行电泳,分开其中的各种成份,然后将抗体加入做双向免疫扩散,已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在两者比例适当的地方形成复合物,有可见的沉淀弧呈现。
4.纸电泳
纸电泳(Paper Electrophoresis,PE)是Z早使用的区带电泳,其为支持介质是滤纸的电泳方法。在分离如糖蛋白、脂蛋白等某些蛋白质特别是氨基酸混合物时效果非常好。
两个装有缓冲溶液的容器之间水平架设滤纸条,在滤纸ZY点上样品,当缓冲液润湿滤纸条后,再将绝缘密封罩盖上,就能够通过电泳电源输入直流电压(100V-1000V)进行电泳。
5.醋酸纤维素薄膜电泳
分离速度快、电泳时间短、样本用量少这些全是醋酸纤维素薄膜电泳优点,醋酸纤维素薄膜电泳对于检测病理情况下微量异常蛋白尤其合适,其在分离和测定血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、结合球蛋白、脂蛋白、同工酶等的临床医学检验方面受到广泛的应用。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明就能够使得分离效果令人满意。
6.凝胶电泳
由区带电泳派生出的一种用凝胶物质作为支持物的电泳方式,称为凝胶电泳(Gel Electrophoresis)。葡萄糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖都属于常用的凝胶。这种介质具有多孔性,和分子筛的作用类似,能够根据分子的大小逐一分离流经凝胶的物质,所以在对蛋白质的分子量测定时被广泛的使用。
7.等电聚焦电泳
利用有pH梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的一种电泳技术,叫做等电聚焦电泳。往有pH梯度的凝胶介质中加入等电点不同的蛋白质,在电场内经过一段时间后,各组分将分别在各自等电点相应的pH值位置上聚焦,Z后,一条清晰而稳定的窄带由样品的各组分在各自的等电点聚焦而成。
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