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发光反应结合免疫反应,用来对抗原或抗体进行检测的方法,称为发光免疫技术。其采用用微量倍增技术,具有良好的特异性和敏感度。其能够检测传统蛋白质、激素、酶以及药物,具有十分广泛的检测范围。全自动电化学发光免疫分析仪、全自动微粒子化学发光免疫分析仪、全自动化学发光免疫分析仪和全自动电化学发光免疫分析仪在临床方面应用比较多。
全自动微粒子化学发光免疫分析仪
特点
采用微粒子化学发光技术定量测定人体内的药物浓度以及微量成分,其具有较高的稳定性、敏感性和特异性。
原理
对经典的免疫学原理进行应用,以3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(AMPPD)作为发光剂,标物采用碱性磷酸酶,固体载体采用磁性微粒,试剂采用单克隆抗体,大分子物质的测定使用夹心法,小分子物质的测定使用抗体捕获法或竞争法。
全自动电化学发光免疫分析仪
特点
在电极表面通过电化学引发的特异性化学发光反应,为电化学发光免疫分析,其属于第三代化学发光免疫分析技术。相较于别的免疫技术,它的优点非常明显:因为所用的标记物三联吡啶钌能够结合半抗原激素、核酸、蛋白质等各种化合物,所以具有十分广泛的检测项目。因为“链霉亲和素生物素”新型固相包被技术为磁性微珠包所采用,能够缩短反应时间,拓宽线性范围,检测的的灵敏度。
原理
在反应杯中加入发光剂标记的抗体和待测标本与包被抗体的顺磁性微粒共同温育,使得性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物形成。当磁性微粒流经电极表面时,安装在电极下的磁铁会吸引住磁性微粒,而缓冲液会冲洗走游离的发光剂标记抗体,同时施加电压在电压,在电极表面进行发光标记物三联吡啶钌[ Ru( bpy)3]2+的电子转移,使得电化学发光产生,光的强度正相关于待测抗原的浓度。大分子量物质检测使用夹心免疫法,小分子量蛋白质抗原检测使用YZ免疫法。
全自动化学发光免疫分析仪
特点
全自动化学发光免疫分析仪为一个化学发光技术结合磁性微粒子分离技术,软件控制、全自动、随机存取的智能分析系统。
在反应体系中,用磁性颗粒作为固相载体,磁性颗粒的直径只有1.0um,使得包被表面积大大的增加了,增加了抗原或抗体的吸附量,使得反应速度加快,使得清洗和分离变得更加的简单。它具有较高的自动化水平,具有较长的试剂贮存时间,能够灵活的操作,可以获得准确的结果。
原理
化学发光免疫分析技术又叫做微量倍增技术,有夹心法和竞争法两种方法。
夹心法:
对于大分子的抗原物质的测定,夹心法使用较多。对抗体与被测抗原进行标记,与此同时结合包被抗体,使得抗体-测定抗原发光抗体的复合物生成。仪器利用某些化学基团在抗原或抗体上标记,该化学基团被氧化后使得激发态形成,在返回基态的过程中将一定波长的光子释放,接受到的光能通过光电倍增管转变为电能,光量度由数字形式来反映,再将测定物的浓度计算出来。
竞争法:
对于小分子抗原物质的测定,该方法使用较多。在反应杯中同时加入待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原以及过量包被磁颗粒的抗体温育,使抗体(或待测抗原与抗体)与标记抗原结合形成复合物。
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