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酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
问题:显色淡,灵敏度偏低
原因1:底物作用时间不足
解决方法:将时间延长到标准时间。
原因2:样品使用了叠氮钠防腐,使酶的活性受到YZ
解决方法:不可以使用NaN3对和酶一起加入的样样品进行防腐。
原因3:蒸馏水受到污染
解决方法:将受到污染的蒸馏水换成合格的去离子水和蒸馏水。
原因4:没有配置稀释比例合适的洗涤液,稀释的倍数高于1:20
解决方法:配置稀释比例合适的洗涤液。
原因5:试剂盒的运输时间过长,受到高温的影响
解决方法:在夏天长途运输的时候,将时间缩短,采取降低温度的方法。
原因6:试剂盒失效
解决方法:失效了的试剂不要使用。
原因7:试剂盒没有在室温下平衡
解决方法:在实验前,将检测试剂盒放置在室温下平衡至少半小时。
原因8:水浴箱温度没有达到37摄氏度
解决方法:将水浴箱的温度调节到37摄氏度,孵育的时候应当尽量少开门。
原因9:孵育时间不足
解决方法:将定时钟校准,使定时准确。
原因10:加入样品的数量偏少。
解决方法:将吸液器校准,紧密结合吸嘴和移液器,吸嘴保证一 次 性使用。
原因11:酶结合物加样量偏少
解决方法:瓶身应当垂直滴加,使液滴确保Zda。
问题:较差的重复性
原因:
1.孵育时间不同
2.洗涤条件不一致
3.操作人员不一致
4.样品的数量偏多,耗费过长的加样时间
5.加样量不同
解决方法:
对于标本重复进行测定,移液器尽量使用同一个,将吸嘴装紧,应当尽可能保持和上一次相同的条件和人员,从而使这些原因导致重复性差的可能性得以排除。
07-26
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