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DNA 片段与RNA片段之间或者DNA片段之间不一样,若两者之间的核苷酸排列顺序互补也能够复性,使新的双螺旋结构形成,这种根据互补碱基配对,结合不完全互补的两条多核苷酸的过程,叫做分子杂交。
应用
30~50核苷酸长通常为探针的已知DNA或RNA片段的长度,能够直接使用由特定细胞中提取的mRNA或者通过化学方法合成。为了使杂交分子检测便利,探针必须预先标记。有很多种标记方法,生物素标记法与同位素标记法是Z常用的。杂交方法包括固相杂交以及液相杂交。
核酸分子间的杂交指的是单链DNA或 RNA分子和有互补碱基的另一DNA或RNA片断结合使双链合成的技术。相互杂交的两种核酸分子间具有有一定的相关性,然而却不必须完全相同。
DNA与RNA间的分子杂交早在1961年就有人创建了,然而其作为基因分析中一种重要的分析技术却直到70年代,能够对基因的特异性进行鉴定。例如,能够将放射性核素标记在有一定已知顺序的某基因的 DNA片段上,使核酸探针构成,结合其通过分子杂交与缺陷的基因,使杂交信号产生,因而显示出缺陷的基因。从而能够进行许多遗传性疾病的产前诊断。如今乙型肝炎的诊断以及其他病毒性疾病和癌瘤的基因结构(癌基因)等的研究也能够使用核酸分子杂交技术。
核酸分子杂交并不具有非常复杂的方法,在进行杂交以前,首先加热待分析的DNA,或者加碱使待分析的DNA变性,从而分离成单链,然后,将放射性核素标记的核酸探针加入,降温退火。就能够使得带有放射性核素标记的双链杂交分子获得。1979年,转膜杂交又被发展出来,就是把电泳分开的核酸片段通过转移电泳往硝酸纤维素膜上转移,从而发生固相杂交反应,使用放射自显影将其检测出来,这就是有名的萨瑟恩氏印迹法。
两个核酸分子间有一定的相似性或相关性或者完全一致是分子杂交的基础,如果使用比较长(几百个核苷酸以上)的核酸探针的片段,那么能够获得的鉴定结果就会非常的准确。然而,如果人工合成比较短(如20~30个核苷酸)的寡核苷酸探针片段,那么有不准确的假阳性现象出现也是在所难免。如今又发展出以碱性磷酸酶标记的酶标核酸探针,以及以生物素标记的核酸探针等非放射性核素标记核酸探针,这必定对分子杂交在临床医学中的广泛应用起到帮助和推动作用。
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