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分子杂交(molecular hybridization)是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。
历史
1961年,Hall等开始了核酸杂交技术的工作,在溶液中将探针与靶序列杂交,通过平衡密度梯度使杂交体离心分离,这种方法,效率低,繁琐,精确度不高,然而它对于核酸杂交技术的研究起到开拓作用。
1962年,diyi种简单的固相杂交方法(DNA-琼脂技术)由Bolton等设计而成。
60年代末,另一种分析细胞基因组的方法由Britten等设计出来,此方法是通过对液相中DNA的复性的研究来对不同来源核酸的复杂度进行比较。
60年代中期,Nygaard等的研究奠定了应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素(NC)膜上的DNA序列的基础。
70年代早期,核酸杂交技通过许多重要的发展而使进展得到促进。
70年代末期到80年代早期,分子生物学技术取得了突破性的进展。特异性DNA探针的来源由于各种载体系统的诞生特别是质粒和噬菌体DAN载体的构建而变得非常丰富。特定基因克隆能够能够由基因组DNA文库和cDNA文库中获得,仅仅需要对细菌进行培养,就能够将大量的探针DNA提取出来,直到今天,许多的特异DNA探针已经被克隆和定性了。
因为固相化学技术和核酸自动合成仪的诞生,印迹技术,DNA的量仅仅需要数微克,就能够对特异基因进行分析。可以使用Southern印迹和Northern印迹来测定特异DNA或RNA序列的量和大小,相比于从前的技术,杂交水平和可信度得到了大大的提高。
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