末端标记DNA探针的方法

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下末端标记DNA的方法。

现在将Klenow片段标记3'末端当作离子来对末端标记的方法进行说明。

注意事项：

1.还有一些其他的方法能够用作末端标记。

2.对于DNA的纯度不作严格的要求，即使制备的质粒的数量很少，也能够进行末端标记来使得探针合成。

操作准备：

试剂：10×末端标记缓冲液，Klenow片段，[α-32P] dNTP，合适的限制酶以及200mmol/L 3种不含标记的dNTP。

设备：水浴锅，高速台式离心机等。

材料：待标记的双链含凹缺3'末端的DNA。

操作步骤：

在25μl反应体系中通过合适的限制酶对1μg的DNA进行酶切。将1mg已酶切的DNA、5ml 2mmol/L10×末端标记缓冲液以及1ml 3种dNTP和适量的[a-32P]-dNTP加水变成50ml溶液混合均匀。将1单位的Klenow片段加入，在室温环境下反应30min。将1ml 2mmol/L 第四种核苷酸溶液加入，在室温环境下保温15min。加热到70℃保温5min，使反应终止。用酚/氯仿抽提后,用Sephdadex G-50柱层析或者用乙醇沉淀来使标记的DNA分离。