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分子杂交(molecular hybridization)是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。
探针制备方法:
1.切口平移法
探针类型:双链DNA
标记类型:放射性和非放射性探针
原理:从双链切口利用Klenow酶的5’-3’外切酶和DNA聚合酶活性使DNA探针合成。
特点:具有较低的灵敏度,简便迅速
2.末端标记法
探针类型:DNA和RNA探针
标记类型:放射性探针
原理:在探针的5’端利用T4核苷酸激酶标记[Y-32P]ATP。
特点:具有很高的灵敏度,和内标探针相比更加的稳定。
3.体外转录法:
探针类型:单链DNA或者RNA探针
标记类型:放射性和非放射性探针
原理:将单链或者变性靶核酸作为模板,使用逆转录酶或者RNA聚合酶使双链探针体外合成,然后再通过没解处理使单链探针得到。
特点:具有很高的灵敏度
4.随机引物法
探针类型:双链DNA
标记类型:放射性和非放射性探针
原理:将变性的靶DNA作为模板,通过随机的八碱基引物使DNA探针体外合成。
特点:具有比较低的灵敏度,简便迅速
5.PCR掺入法
探针类型:双链DNA
标记类型:放射性和非放射性探针
原理:通过PCR使DNA探针合成。
特点:需要将引物合成,具有较高的灵敏度,模板不受限制。
6.末端转移法
探针类型:双链或单链DNA
标记类型:放射性和非放射性探针
原理:在双链或者单链的DNA探针的3’-OH上利用DNA末端转移酶链接核苷酸。
特点:需要TDT酶,简便迅速。
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