多肽合成混合酸酐法

对于形成混合酸酐，既可以使用无机酸，也可以使用有机羧酸。但是，实际上，得到广泛应用的只有少数几个。在大多数情况下，采用氯甲酸烷基酯。从前氯甲酸乙酯得到频繁使用，如今主要换成了氯甲酸异丁酯。

酸酐是通过氯甲酸酯以及羧基组分反应形成。两个互相竞争的羰基的亲电性和（或）空间位阻为其氨解反应的区域选择性依赖的条件。在由氯甲酸烷基酯（活化组分，例如源于氯甲酸烷基酯）以及N保护的氨基酸羧酸盐（羧基组分）形成混合酸酐时，，主要由亲核试剂胺对氨基酸组分的羧基进行进攻，来使预期的肽衍生物形成，并且将游离酸形式的活性成分释放出来。当对氯甲酸烷基酯（R1＝异丁基、乙基等）进行应用时，不稳定的游离的单烷基碳酸，会立即分解形成相应的醇和二氧化碳。但是，对选择亲核进攻的区域来说，也有一些相反的报道，原来的N保护氨基酸组分和氨基甲酸酯作为产物。

在二氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、乙酸乙酯或DMF中分别溶解N保护的氨基酸或肽使用等当量的三级碱（N－甲基哌啶、N－甲基吗啉、N－乙基吗啉等）处理从而使得混合酸酐形成。之后，为了使不对称酸酐（活化）形成，在温度－15℃-5℃环境下，剧烈搅拌，同时将氯甲酸烷基酯加入其中。在很短时间的活化之后，将亲核性氨基酸组分加入。若作为铵盐来使用（需要更多的碱），那么对于过量使用碱应当有所避免。若对于以上的反应条件严格地遵守的话，就能够很容易地进行混合酸酐法，在缩合方法方法中，混合酸酐法也是Z有效的方法之一。

对于混合酸酐的稳定性，副产物氨基甲酸酯和消旋等方面的减少，Benoiton和他的同事进行了深入研究，通过这一研究，对于反应机理有了进一步的了解，并且使该方法的缩合效率得到提高。一直到现在该方法的应用非常的广泛。通过对产生过量氨基甲酸酯的原因进行研究，特别是在异亮氨酰基和缬氨酰基的情况下，如果三及碱使用N－甲基哌啶以及溶剂使用二氯甲烷，那么就可以使主要副反应得以避免。混合酸酐水解的稳定性比较高，所以混合酸酐的纯化能够利用用水洗涤有机相进行。

在混合酸酐缩合法的实际应用中，需要注意以下几个方面：

尽管对于混合酸酐的形成和随后的缩合反应，含水的DMF可以算作一个好的溶剂，然而相比于使用四氢呋喃或卤化试剂为溶剂，它对于消旋的促进作用要高得多。