1.不同纯度级别多肽的使用领域是什么?
答:由于多肽的纯度级别不同,其的使用领域也存在差异。
(1)酶底物定性研究、体外生物活性分析,免疫封闭、磷酸化研究、亲和层析,单抗制备等研究
可以使用研究级80%以上纯度的多肽。
(2)细胞体内外活性分析,定量分析等大多数研究均可以使用90%以上的纯度,纯度达到95%以上就能够用于NMR研究。
(3)粗品和脱盐级别的纯度与多肽的长度相关。Fmoc固相多肽合成具有超过95%的氨基酸的偶连效率。
(4)免疫抗体为多肽的一个非常重要的用途,免疫的要求在通常情况下需要达到疫级65-75%左右纯度。若纯度为90-95%的多肽可以使抗体产生,那么65-75%纯度的多肽通常也不会失败。纯度高固然很好,然而需要花费相对比较长的时间以及比较高的代价,同样,70%左右的纯度就能够满足Elias测定抗体效价。
2.制备多肽抗体,常用的载体有那些?如何选择?
答:多肽具有很小的分子量,比较差的免疫应答效果,需要和载体偶连来使免疫源性得以提高。通常将高分量的蛋白质作为载体。KLH(铜蓝蛋白),BSA,OVA等为常用的载体,KLH为shou选的载体。在ELISA测定多肽抗体效价时,一些多肽需要与BSA等偶连后再包板,直接包板比较困难。
3.关于AntigenGrade多肽必须在在多肽的一端增加Cysteine吗?
答:不一定,氨基酸组成同偶连的方式与偶连的活化剂有关联。
MBS:S-S是由Cys的基团载体中其他SH连接而形成,若序列中没有Cys,则应当对Cys基团进行添加,Z好是在N端添加。
EDC:通过C端COOH连接,通常要求序列中没有anamidatedC-terminus或者Glu(E)以及Asp(D)。
Act.EDCMethod:通过N端的氨基偶连,要求序列中没有乙酰化N端或者没有Lys(K)。
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