多肽标记及修饰介绍

到目前为止，具有非常多的多肽标记及修饰的内容，其在多肽试剂，多肽抗体与多肽生物学的研究中得到了广泛的应用。磷酸化修饰，生物素标记，荧光标记（FAM，FITC）以及非放射性核素标记（C13，H2）均为目前比较常用的多肽标记及修饰的内容。

多肽标记及修饰

生物素标记

70年代后期，免疫学中应用了生物素-亲合素系统(biotin-avidinsystem，BAS)，该系统得到了迅速的发展，成为了一种新型生物反应放大系统。因为生物素与亲合素之间高度亲和力及多级放大效应为其所具有，并且能够有机地结合荧光素、酶、同位素等免疫标记技术，从而进一步的提高了各种示踪免疫分析的特异性和灵敏度。主要在对生物素对硝基酚酯(pBNP)和多肽氨基的生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)标记时被使用，其中，相对Z为常用的是多肽氨基的生物素N-羟基丁二酰亚胺酯(BNHS)，当然对生物素直接进行使用也能够标记，由于有个游离的羧基在其结构上，缩合采用HBTU/HOBt/DIEA方法，因为生物素具有很低的溶解度，需要使用DMSO/DMF的混合溶剂来使溶解度增加。

磷酸肽合成

在生命过程中，磷酸肽发挥了重要的作用，多肽上的Ser，Thr，Tyr为磷酸化的位置。目前，通常采用磷酸化氨基酸来进行磷酸肽的合成，通常使用的都是单苄基磷酸化氨基酸，Tyr也能够直接对磷酸化氨基酸进行使用。通常采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接磷酸化氨基酸。然而该方法也有缺点，尤其是在多磷酸化多肽或长肽的合成时，具有较低的连接效率，从而获得了较低纯度的产品。

我们考虑采用后磷酸化方法来合成这种磷酸化多肽。在完成多肽合成后，将要标记的氨基酸的侧链保护基选择性地脱去。对于Tyr，Thr，反应能够直接使用侧链不保护的氨基酸。

非放射性核素标记

目前为止，在非放射性核素标记中，C13，H2依然得到广泛的使用，由于其放射性小，安全度高。如今比较完全的非放射性标记的氨基酸能够根据正常的多肽合成方法在多肽上直接连接标记好的氨基酸。

荧光标记

因为荧光标记没有放射性，而且操作简单，所以，其广泛应用于生物学研究。荧光标记方法和荧光试剂的结构相关联，有游离羧基的采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接，与接肽反应采用的方法相同。然而需要在连接FITC前，增加一个氨基己酸，避免在切割的过程中被TFA切割掉。