蛋白质纯化方法-盐析方法

蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。

概念

蛋白质的溶解度受到中性盐的影响非常显著，通常在低盐浓度下，蛋白质的溶解度随着盐浓度升高而增加，这种现象叫做盐溶，当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度会有不同程度的降低，并且先后析出，这种现象叫做盐析，在蛋白质溶液中加入大量盐，高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，能够将蛋白质分子的水化层夺取，使之“失水”，因此蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。当盐析时，如果溶液pH在蛋白质等电点，那么就会有更好的效果。因为各种蛋白质有着不同的亲水程度以及大小不一的分子颗粒，所以也需要不同的盐浓度。所以对混合蛋白质溶液中的中性盐浓度进行调节，能够分段沉淀各种蛋白质。

影响盐析的因素

1、pH值：

在浓盐溶液中，大多数蛋白质在等电点时有着Zdi的溶解度。

2、蛋白质浓度：

当蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质一般和其他蛋白质夹杂在一起沉淀出来，所以，要加等量生理盐水在盐析稀释血清，使得蛋白质含量在2.5-3.0%。

3、温度：

通常能够在室温中进行蛋白质的盐析，除了对温度敏感的蛋白质在低温(4度)操作以外，也有如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白的蛋白质，和0度相比较，其在较高的温度有更低的溶解，能够有更好的盐析效果。

种类

中性盐为蛋白质盐析常用的盐，主要包括磷酸钠、氯化钠、硫酸钠、、硫酸镁、硫酸铵等。其中硫酸铵应用Z多。温度系数小而溶解度大是它的优点。在这一溶解度范围内，能够盐析出许多蛋白质和酶。除此以外，和其他盐相比较，硫酸铵分段有着更好的盐析，蛋白质变性的情况不容易引起来。4.5-5.5之间通常为硫酸铵溶液的pH范围。当使用其他pH值进行盐析时，需要使用硫酸或氨水进行调节。

用盐析沉淀分离蛋白质后，需要除去蛋白质中的盐，透析为常用的办法，就是在透析袋内装入蛋白质溶液，使用缓冲液进行透析，并且对缓冲液进行不断的更换，由于透析所需所需较长的时间，因此在低温中进行Z好。除此以外，盐的去除方法是使用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱，只需要比较短的时间。