质粒DNA提取方法以及常见问题

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编为你介绍一下破裂解法。

破裂解法原理

离心柱型质粒DNA提取试剂盒采用改进的SDS-碱裂解法将使细胞裂解，离心吸附柱内的硅基质膜，在低PH值、高盐的状态下对溶液中质粒DNA选择性地结合，再利用漂洗液去除杂质以及其他细菌成分，Z后利用高PH值、低盐从硅基质膜上洗脱掉纯净质粒DNA。

实验准备

1.器材

凝胶成像系统、电泳设备、电子天平、马克笔、定时器、移液器、漩涡混合仪、台式高速离心机、微波炉、锥形瓶、试剂瓶、量筒等。

2.耗材

一次性手套、各规格Tip、无菌2毫升或者1.5毫升EP管。

3.试剂

TAE电泳缓冲液、抗生素、LB培养基、质粒小提试剂盒（离心柱型、YRBIO）、琼脂糖、DNA Loading Buffer、GoldView核酸染料。

4.材料

对数期菌株

试剂配方

Ⅰ液：25mM Tris-HCL(pH 8.0)、10mM EDTA(pH 8.0)

Ⅱ液：0.2 M NaOH、1％SDS

Ⅲ液：3 M KAc（pH 4.2）

RNase A:10  μg/ml RNase A

洗脱液EB：10mM Tris-HCL(pH 8.0)、1mM EDTA(pH 8.0)

质粒DNA提取实验流程

对数期菌体-Ⅰ液充分重悬-Ⅱ液裂解-Ⅲ液中和-离心-上清液-过柱-离心洗涤-干燥溶解-质粒DNA溶液

质粒DNA提取常见问题

1.量少

（1）严谨型质粒（2）菌株老化（3）裂解不完全（4）菌体量少（5）凝胶存在问题（6）菌体重悬不彻底

2.质粒断裂

（1）裂解时动作太剧烈（2）Ⅱ液裂解耗时过长

3.RNA残留

（1）酶的量不足 （2）RNase A被忘记加入（3）Ⅰ液中RNase A失效