蛋白质印迹法含量测定

1979年，瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin提出了蛋白质印迹法。1981年，首次在所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中被叫做Western Blot。蛋白免疫印迹（Western Blot）是从凝胶往固相支持物NC膜或PVDF膜上转移电泳分离后的细胞或组织总蛋白质，然后用特异性抗体来对某特定抗原检测的一种蛋白质检测技术，现在在疾病早期诊断、抗体活性检测以及基因在蛋白水平的表达研究方面得到了广泛的应用。

含量测定

1、标准曲线的制作

（1）从－20℃将1mg/ml BSA取出，室温融化后备用。

（2）将1.5ml离心管取18个，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。

（3）根据下面的表格将各种试剂加入到各管中。

（4）混匀后，室温放置2分钟，在生物分光光度计（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。

2、样品蛋白含量的检测

（1）取1.5ml离心管足够多，将1ml4℃储存的考马斯亮蓝溶液分别加入到每个离心管中，在室温下放置30分钟以后，就能够被用来对蛋白进行检测。

（2）将100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入到取出的一管考马斯亮蓝溶液中，混匀放置2min中，就能够作为空白样品，在比色杯中倒入空白样品，在做好标准曲线的程序下按blank对空白样品进行检测。

（3 ）将空白样品弃掉，比色杯使用无水乙醇清洗2次（每次0.5mL），再将其使用无菌水洗一次。

（4）将95ul 0.15mol/L NaCl加入到取出的一管考马斯亮蓝溶液中，混匀后静置2min，往扣干的比色杯中倒入按sample键对样品进行检测。