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手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。
原理
传统的聚丙烯酰胺平板电泳被淘汰,取而代之的是毛细管电泳,abi prism 310型基因分析仪就是采用毛细管电泳技术,此公司ZL的四色荧光染料标记的ddntp得到应用,所以利用单引物pcr测序反应,相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链dna物混合为生成的pcr产物,使四种荧光染料的测序 pcr产物能够在一根毛细管内电泳,从而使泳道间迁移率差异的影响得以避免,使测序的精确度得到大大的提高,因为分子大小的差异,在毛细管电泳中有着不一样的迁移率,当其从毛细管读数窗口段经过的时候,激光检测器窗口中的ccd(charge-coupled device)摄影机检测器能够逐个检测荧光分子,利用光栅将激发的荧光分光,来对代表不同碱基信息的不同颜色的荧光加以区分,并且同步成像于ccd摄影机上,不同荧光经过分析软件能够被转变为dna序列,从而使dna测序的目的达到。可以通过荧光吸收峰图、碱基排列顺序或者凝胶电泳图谱等多种形式将分析结果输出。
DNA测序仪是一台对dna片段的碱基顺序或大小进行测定和定量的仪器,其还可以自动数据收集、自动进样以及自动灌胶。genescan胶(pop 4)和dna测序胶(pop 6)等凝胶高分子聚合物由pe公司提供,这些凝胶颗粒有着均一的孔径,使配胶条件不相同对测序精度的影响得以避免。电泳附件、电脑、彩色打印机、毛细管电泳装置等为DNA测序仪的主要构成组件。资料收集,分析和仪器运行等软件均包含在电脑里。因为全新的ccd摄影机检测器为DNA测序仪所应用,使pcr片段大小分析和定量分析时间缩短为10~40分钟,dna测序时间缩短到2.5小时。
用途
该仪器的应用相当地广泛,能够进行进行dna测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(sscp)、微卫星序列分析、长片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,临床上不但能够进行常规dna测序,而且还能够进行法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定、基因突变检测、hla配型、单核苷酸多态性(snp)分析等。该仪器之所以有如此多的用途是因为该仪器具有dna测序,pcr片段大小分析和定量分析等功能。
现状和意义
当今世界,如果要评说哪个地方会诞生传奇,那么必定是高科技领域,从前DNA测序还作为一个前沿技术令人高山仰止,如今却成为一个生命科学常规技术,迅速地得到普及,目前为止,能够和电脑芯片运算能力增强的速度相媲美的也就只有DNA测序成本下降的速度,DNA测序的发展除了在降低成本方面得到了体现,还在高通量测序大幅度提高了工作效率方面得以表现,其铺平了DNA测序产业化的道路。
Zda的基因组测序及研究应用ZX之一位于深圳的华大基因研究院,华大基因承担了人类基因组计划1%的工作任务,之后又对国际HAPmap计划进行了参与与完成,并且将叫做“炎黄一号”di一个ZG人也是di一个亚洲人的基因组测序完成了。
有50余个研究小组在威康信托基金会中,其是英国Zda的生物医学资助机构之一。双向障碍病、冠心病、克罗恩氏病、风湿性关节炎、高血压以及I型糖尿病和II型糖尿病等多疾病的基因的筛查这一项颇具野心的庞大计划和挑战由他们在过去的几年开展了。有24处与上述7种疾病相关的位点通过对1.7万名英国人的SNPs筛查分析,在基因组中被找到,有10个致病基因在II型糖尿病的筛查中被找到和证实。
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