DNA测序方法

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

测序方法

在分子生物学研究中，目的基因的进一步研究和改造是以DNA的序列分析为基础的。Sanger（1977）发明的双脱氧核糖核酸链末端终止法为用于测序的主要技术，Sanger测序法的应用非常的广泛。Sanger法是以核苷酸开始于某一固定的点，终止于某一个随机的特定的碱基处，并且在每个碱基后面进行荧光标记，使得以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸产生，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而使得可见的DNA碱基序列被获取为依据。有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)包含于每个反应，让其扩增，并且有一种不同的限量的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)混入将其终止。因为延伸所需要的3‘-OH基团为ddNTP所或缺，从而在G、A、T或C处择性地终止延长的寡聚核苷酸。反应中相应的双脱氧决定了终止点。为了使反应得到一组长几个至千以上个，相差一个碱基一系列片断，可以调整每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度。它们的起始点相同，然而终止点却在不一样的核苷酸上，大小不同的片段能够通过高分辨率变性凝胶电泳分离。凝胶处理后能够使用非同位素标记或者X-光胶片放射自显影来进行检测，这即是Sanger法测序的原理。

现状和意义

有50余个研究小组在威康信托基金会中，其是英国Zda的生物医学资助机构之一。双向障碍病、冠心病、克罗恩氏病、风湿性关节炎、高血压以及I型糖尿病和II型糖尿病等多疾病的基因的筛查这一项颇具野心的庞大计划和挑战由他们在过去的几年开展了。有24处与上述7种疾病相关的位点通过对1.7万名英国人的SNPs筛查分析，在基因组中被找到，有10个致病基因在II型糖尿病的筛查中被找到和证实。

DNA测序方法的飞速发展除了使人类的全基因组序列为我们所知晓，而且还使得我们充分掌握了小麦、水稻、家蚕以及很多细菌。此时，科学家们的新目标也就变成了对一段序列所代表的生物学意义的探明。用于编码基因仅仅只有1.5%存在于核苷酸组成的庞大序列中，除此以外，扮演调控基因表达的角色有少许，其中功能未知的“垃圾DNA”占绝大部分，这一发现是科学家通过分析人类基因组序列获得的。由表面可知，人与人之间有着缤纷复杂的不同之处，然而，深入到DNA水平上，却仅仅存在0.1%基因编码序列上的不同。大多数时候，人与人之间在一条序列上的差异只有一个核苷酸，科学家将这种现象命名为单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，简称SNPs）。