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手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。
三代:直接测序
随机切割基因组DNA使其成为100 kb左右的片段,将其制成单链,并且和六寡聚核苷酸探针杂交,之后再对结合了探针的基因组文库片段进行驱动,使其从可寻址的纳米孔阵列通过,能够独立测量通过每个孔的离子电流,为了对探针杂交在每个基因组片段上的精确位置进行确定,对电流的变化进行追踪,基因组片段文库通过基因组片段上杂交探针的重叠区域进行排列,使得一组完整的基因组探针得以建立。
二代:循环阵列合成测序法
在第2代测序技术中,序列均是由化学发光物质或荧光协助,通过对DNA连接酶或者DNA聚合酶进行读取,在DNA链上连接碱基的过程中将光学信号释放出而间接确定的。不仅需要昂贵的光学监测系统,而且还需要对大量的光学图像进行记录、存储和分析,这均会增加仪器的成本与复杂性。依赖生物化学反应对碱基序列进行读取更加使得使用的试剂、耗材有所增加,其在测序成本中占据相当大的比例。对序列信息直接进行读取,化学试剂不使用,使得测序成本进一步降低,变得越来越可取。对于一个突破瓶颈发生巨变的领域的未来很难准确预测。
在业内,DNA测序有着高贵的出身,其将碱基序列这一基因密码破解,融合了IT技术与基因组学,将生物信息学这一新兴学科开创和发展了出来。传统的生物学技术被以生物信息学为代表的基因技术彻底颠覆了,对生命科学未来发展潮流起到引ling作用,在yi疗健康、环境保护、新能源、新材料、现代农业等热门领域以它为代表的基因工程得到了广泛地应用。
从前将致病相关基因从数万个人类基因中筛选出来犹如大海捞针。为了对这个基因究竟在何处想方设法的定位,科学家需要对同一个家族的多位患者的标本进行获取。设计高通量药物,致病或抑病基因的鉴定、疾病易感人群的筛查甚至个性化yi疗由于具备了如今快速测序技术和SNPs这个强有力的工具而不再是需要向往的事。
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