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手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。
测序凝胶板的制备
1、处理玻璃板
需要保持银染测序的玻璃板十分干净,通常先使用去污剂和温水对其进行洗涤,再使用去离子水对玻璃板进行冲洗,将残留的去污剂除去,Z后使用乙醇对玻璃板进行清洗。凝胶染色时背景会由于玻璃板上遗留的去污剂微膜而偏高(棕色)。经粘合溶液处理能够在短玻璃板化学交联凝胶。这一步在银染操作过程中使凝胶撕裂得以避免起到非常重要的作用。
处理长玻璃板
(1)清洗过的长玻璃板用浸透Sigmacote溶液的棉纸进行擦拭。
(2)5~10min以后,玻璃板上多余的Sigmacote溶液用吸水棉纸擦拭掉。
处理短玻璃板
(1)将5 ml粘合硅烷(Bind Silane)加入到1 ml95%乙醇,0.5%冰乙酸中,使新鲜的粘合溶液配置而成。
(2)必须使用经新配的粘合溶液浸透的吸水棉纸对仔细清洗过并已经自然干燥的玻璃板的整个板面进行擦拭。
(3)在4-5min以后,使用95%乙醇对玻璃板进行单向擦拭,之后沿垂直方向略用力进行擦拭,将上述清洗过程重复三次,每次都必须替换干净的纸,,将多余的粘合溶液除去。
2. 制备凝胶
(1)在使用粘合硅胶和Sigmacote对玻璃板进行处理以后就能够进行玻璃板的固定。该方法是在玻璃板左右两侧放上0.2 mm或0.4 mm厚的边条,在其上压另一块玻璃板。将鲨鱼齿梳平的一面边缘插入长玻璃板的一侧,用夹子固定住。
(2)测序凝胶根据所需要的凝胶浓度按下表进行制备,通常6%~8%的胶浓度能够使比较好的结果获得,在配制过程中,首先使用适量双蒸水溶解尿素,再将Acr&Bis和10×TBE缓冲液加入,再将终体积使用双蒸水调节到99.2毫升,并且使用0.45毫米的滤膜进行过滤,然后将过硫酸铵和TEMED加入。对尿素进行溶解的时候,加热没有必要。若确实需要加热,那么应当等到完全冷却溶液以后,才能够将TEMED和过硫酸铵加入,通常灌胶4~6min后,聚合就会开始,如果聚合不是太好,那么高浓度的TEMED和过硫酸铵就需要被使用。
(3)配制好胶以后,就能够对胶板进行灌制。通常是沿着压条边缘往玻璃板的槽中缓慢地倒入凝胶,将凝胶倒完以后,静止放置让其完全聚合。
Zda的基因组测序及研究应用ZX之一位于深圳的华大基因研究院,华大基因承担了人类基因组计划1%的工作任务,之后又对国际HAPmap计划进行了参与与完成,并且将叫做“炎黄一号”di一个ZG人也是di一个亚洲人的基因组测序完成了。
在业内,DNA测序有着高贵的出身,其将碱基序列这一基因密码破解,融合了IT技术与基因组学,将生物信息学这一新兴学科开创和发展了出来。传统的生物学技术被以生物信息学为代表的基因技术彻底颠覆了,对生命科学未来发展潮流起到引ling作用,在YL健康、环境保护、新能源、新材料、现代农业等热门领域以它为代表的基因工程得到了广泛地应用。
该仪器的应用相当地广泛,能够进行进行dna测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(sscp)、微卫星序列分析、长片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,临床上不但能够进行常规dna测序,而且还能够进行法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定、基因突变检测、hla配型、单核苷酸多态性(snp)分析等。该仪器之所以有如此多的用途是因为该仪器具有dna测序,pcr片段大小分析和定量分析等功能。
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