DNA测序凝胶的银染步骤

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

测序凝胶的银染

染色过程要求在塑料盘中浸没凝胶，所以至少准备大小与玻璃板类似的两个盘子，以便使用。在将新鲜溶液加入到盘中之前，盘子必须使用高质量的水来进行洗涤。

1、在结束电泳以后，使用一个塑料片子将两板小心地分开，凝胶应该在短玻璃板上牢固地附着。

2. 固定凝胶：

在塑料盘放入凝胶（连玻璃板），使用固定/停止溶液浸没，充分振荡20min或者完全看不见样品中染料为止。能够将胶保存于固定/停止溶液中过夜（不振荡），对固定/停止溶液进行保留，在对显影反应终止的时候使用。

3. 洗胶：

胶使用超纯水振荡洗涤3次，每次2min，从水中取出，拿着胶板边沿静止10～20秒使水流尽之后再转移至下一溶液。

4. 凝胶染色：

往染色溶液中移入凝胶，摇动30min。

5. 凝胶显影

（1）将甲醛（3 ml）和硫代硫酸钠溶液（400 μl）加入到显影溶液中使显影液的配制完成。

（2）将凝胶从染色溶液中取出往装有超纯水的盘中放入浸洗5～10秒。从超纯水中往显影溶液中转移凝胶的总时间不能超过5～10秒。信号微弱或丧失信号均是由于浸泡时间过长导致的。如果浸泡时间过长，那么就可以对第五步重复浸泡使用染色液。

（3）马上往1升（总量的一半）预冷的显影液转移入凝胶振荡直至有di一批条带开始出现或者开始显现模板带，向着移入剩下的1升显影液中移入凝胶继续显影2～3min一直到出现所有条带。

6. 固定凝胶：

将等体积的固定/停止溶液直接加入到显影液中，将显影反应停止，使凝胶固定。

7. 将凝胶在超纯水中浸洗两次，每次2分钟，为了防止拿着胶板边缘时在胶上印上指纹，需要在本操作中戴手套。

8. 用抽气加热法对凝胶进行干燥，或者在室温干燥凝胶，在可见光灯箱或亮白，黄色背景（如纸）上对凝胶进行观察，如果需要对记录进行yong久保存，那么实验结果就能够使用EDF胶片保留。

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从前将致病相关基因从数万个人类基因中筛选出来犹如大海捞针。为了对这个基因究竟在何处想方设法的定位，科学家需要对同一个家族的多位患者的标本进行获取。设计高通量药物，致病或抑病基因的鉴定、疾病易感人群的筛查甚至个性化YL由于具备了如今快速测序技术和SNPs这个强有力的工具而不再是需要向往的事。

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