dna高通量测序技术种类

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

测序技术

高通量测序技术又被叫做“下一代”测序技术，它的标志为可以一次性并行测定几十万到几百万条DNA分子序列。

由于测序原理和技术差异、影响力、发展历史等，主要包括DNA纳米球测序、离子半导体测序、454焦磷酸测序、大规模并行签名测序等

可反转的染料终止法

可反转的染料终止法是由Solexa公司开发出来的。首先在与固体介质（如玻璃板）交联的引物上连接DNA模板，并且扩增使得本地微克隆形成。往体系中依次添加四种ddNTPs，在下一种核苷酸添加之前会将未结合的ddNTPs冲洗走，这种方法不同于454的焦磷酸测序，一次只对一个碱基进行延伸。

454 焦磷酸测序

并行焦磷酸测序方法为454公司发展起来的。DNA的扩增发生在油溶液包裹的水滴中。刚开始只有一个链接到微珠上的DNA模板分子以及一个包被大量引物的磁珠包含于一个水滴中。在特制的PTP板上加载乳状PCR产物，有上百万个孔位于板上，每个微孔只能容纳一个磁珠。dNTP通过DNA聚合酶往模板上聚合时，会有一个焦磷酸分子释放出来。会有一个ATP分子由PPi与APS在ATP硫酸化酶的催化作用下生成。在荧光素酶的作用下，荧光素会被ATP分子氧化成氧化荧光素，与此同时CCD光学系统会捕获产生的可见光，使一个特异的检测信号被获得。信号强度正相关于相应的碱基数目，将四种dNTP按照按顺序循环添加，将发生时间以及信号强度读取出来，使DNA序列测定得以实现。

大规模并行签名测序

大规模并行签名测序技术是90年代由Lynx Therapeutics公司发展起来的。“下一代”测序技术发展的先驱，即是大规模并行签名测序。

大规模并行签名测序为一种以磁珠和接头连接和解码的复杂技术，具有较短的测定结果，在转录组测序时常常被使用，对基因表达量进行测定。大规模并行签名测序测定结果有序列偏好性从而使DNA中某些特定序列容易丢失，并且具有较为复杂的操作，新的方法已经逐渐将其替代。

聚合酶克隆

聚合酶克隆为05年哈佛George Church实验室发展起来的，其为以自动显微镜以及乳化PCR等等技术为基础的测序方法。ABI公司的SOLiD测序技术平台已经整合了相关技术。

临床应用

1、应用于肿瘤诊断

遗传基因和环境因素共同作用使肿瘤发生，内因是遗传基因，和肿瘤易感基因是否在人体内相关联。人体内是否存在肿瘤易感基因或家族聚集性的致癌因素能够通过肿瘤易感基因的检测检测出来。

2、应用于药物易感基因

相同的药物有不同的用药结果可能是由于个体基因型存在差异，通过对患者相应的基因型进行确定能够使更准确的用药得以实现，使用药效果得到更大程度的提高。

3、应用于无创产前筛查

胎儿的基因能够通过对孕妇血液的抽取检测出来，胎儿产前筛查可以通过基因测序进行。使得胎儿的健康状态提前知晓。

4.应用于感染性疾病诊断

测序技术能够对碱基序列进行精确的分析，通过序列比对，直接行鉴定、分型和溯源各种病原体，使某一感染性疾病对应病原体的基因序列得以明确，使得用药和预防能够有针对性，使用药的有效性和安全性得到提高。同时新型病原体的发现也能够使用基因测，预防工作可以做得更加的好。

5、应用于遗传性疾病诊断

因为基因突变引起的疾病具有遗传性和终身性的特点，如果患上这种病，会给自身和整个家族带来痛苦。通过对被检人员进行基因测序，对基因突变情况进行查看，判断基因遗传病是否存在，或者对后代患病的概率进行推断，以便指导婚育，使遗传性疾病的发病得以减少。