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手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。
HeliScope测序仪
Quake团队设计开发了HeliScope 测序仪。
1、HeliScope 测序仪相同于454 测序仪,不同步完成测序,由每条模版的序列来决定测序速度,因为渗入大量的未标记碱基、不发光碱基和污染碱基,会有比较高的检测确实突变的出错率,然而具有比较低的检测碱基替换突变的误差率。
2、精密的全内反射显微镜技术为HeliScope测序仪所利用,在完成测序以后将延伸的合成链去掉,另一次测序从相反的方向再进行,使得同一模板的第二个序列信息生成。原始数据准确度由于双向测序得到了显著的提高。
3、荧光信号的增强需要用PCR扩增来实现的技术难题被该方法克服了,更加灵敏的图像传感器在该方法中得到采用。能够将单分子dNTP携带的荧光基团发出的信号检测出来,15 ms是单次的扫描时间。
Solexa基因组分析仪
Solexa 分析仪一般也被叫做Illumina 测序仪,克隆单分子阵列技术是其所使用的方法。
1、打断目的DNA分子,使其变成100-200 bp的片段,在固相基质上随机连接,经过 Bst 聚合酶延伸和甲酸胺变性的桥PCR循环,使得大量的DNA簇生成,大约有1000个相同序列的DNA 片段在每个DNA簇中。
2、之后的反应类似于Sanger法,将用4种不同荧光标记并结合了可逆终止剂的 dNTP加入。有八道独立检测的位点在固相基质上每个孔中,因此,八个独立文库能够一次性并行,数百万的模版克隆能够被容纳,能够检测混合在一起的多个样品,每个固相基质上能够读取的碱基一次有10亿个。
3、DNA簇和单链扩增产物的通用序列杂交,因为终止剂的作用,DNA聚合酶每次循环仅有一个 dNTP得到延伸,标准的微阵列光学检测系统对每次延伸所产生的光信号进行分析测序,下一次循环中裂解掉终止剂和荧光标记基团,然后使dNTP继续延伸,使边合成边测序技术得以实现。
4、因为光信号衰减和移相的原因造成只有比较短的序列读长,能够进行每个 DNA 测序片段的阅读长度只有75 bp的末端双向测序反应。
Zda的基因组测序及研究应用ZX之一位于深圳的华大基因研究院,华大基因承担了人类基因组计划1%的工作任务,之后又对国际HAPmap计划进行了参与与完成,并且将叫做“炎黄一号di一个ZG人也是di一个亚洲人的基因组测序完成了。
当今世界,如果要评说哪个地方会诞生传奇,那么必定是高科技领域,从前DNA测序还作为一个前沿技术令人高山仰止,如今却成为一个生命科学常规技术,迅速地得到普及,目前为止,能够和电脑芯片运算能力增强的速度相媲美的也就只有DNA测序成本下降的速度,DNA测序的发展除了在降低成本方面得到了体现,还在高通量测序大幅度提高了工作效率方面得以表现,其铺平了DNA测序产业化的道路。
21世纪di一个十年里,DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里,生物技术和信息技术相互融合,相互作用,相互影响。
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