引物对测序质量的影响

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

引物对测序质量的影响

（1）引物二聚体

现象：后面比较正常，前面高于100bp，有较高的噪音

原因：没有将引物二聚体去除干净。

方法：将胶割掉，进行纯化。

（2）双引物结合

现象：有两个峰从一开始就出现，和非单克隆有区别。

原因：有两个引物结合位点在模板上，同时结合两个引物。

方法：对两个引物重新设计

（3）模板没有引物结合位点

现象：特异性的峰图不存在。

原因：引物不能和模板结合。

方法：对引物重新设计

（4）引物合成时多或者少一个碱基

现象：有相同荧光信号的小尾巴位于每个峰后面。

原因：引物合成时多或者少一个碱基

方法：将引物重新合成。

（5）引物不纯

现象：整个峰图均有较高的噪音

原因：有较多杂质在引物中，引物具有比较低的纯度。

方法：脱盐纯化的引物具有比较低的纯度，不适合测序，然而可以用来做普通pcr；测序引物Z好使用PAGE或者HPLC纯化过的。

在DNA测序商业化的浪潮下，完成5个以上有重大经济价值的基因或蛋白的转化应用、约500个新的功能基因的发现，10000种微生物、100种动植物基因组测序等目标在我国《生物产业发展“十二五”规划》中被提出。根据30-50万元为微生物进行“基因组完成图”测序的大致费用而言，千亿元级别为DNA测序带来的市场容量，其还只是DNA测序商业应用市场的冰山一角。

21世纪di一个十年里，DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里，生物技术和信息技术相互融合，相互作用，相互影响。