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在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合,使得一个杂种细胞形成,即是细胞融合(cell fusion)。
细胞融合中的化学法诱导
1、PEG诱导
2、PEG结合高Ca2+和PH诱导法
3、NaNO3诱导
NaNO3可以对原生质体表面负电荷进行中和,对原生质体聚集起到促进作用,不会损害原生质体,然而却没有较高的融合效率。
4、高Ca2+和pH诱导法
基本原理
聚乙二醇(PEG)是一种多聚化合物,实验室用的PEG,200-2000之间为平均相对分子质量范围,固体状态通常超过1000,液体状态通常小于1000.
机制
因为有大量负电荷为PEG分子所带有,静电键是由于其和原生质体表面的负电荷在钙离子的连接下形成的。从而分子桥在原生质体之间形成,导致原生质体发生粘连从而对原生质体的融合起到了促进作用。除此之外,PEG使得类脂膜的流动性得以增加,从而增大了原生质体的核、细胞器发生融合的可能性。
质膜结合的PEG分子使用高Ca2+和PH溶液进行洗脱,造成电荷平衡因此失调而重新分配的结果,连接两种原生质体上的正负电荷,从而使得具有共同质膜的融合体形成。
物理法
基本原理
尽管很晚才开发,然而目前为止,有着比较广泛的应用。融合仪和融合板为电融合必备的仪器。细胞膜表面的氧化还原电位经过直流电脉冲的诱导发生了改变,粘合了异种细胞且瞬间破裂质膜,然后开始连接质膜,一直到完整的膜闭和成功,使得融合体形成。
相比于PEG法,电融合法有如下优点:
1、有很高的融合率,很强的重复性以及对原生质体伤害小。
2、操作简单,装置精巧,能够在显微镜下观察或录像融合过程。
3、使PEG诱导后的洗涤过程免去了,更加可以对诱导过程进行控制。
11-09
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