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在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合,使得一个杂种细胞形成,即是细胞融合(cell fusion)。细胞融合使得异核体(heterokaryon)形成、通过细胞有丝分裂异核体进行核融合、Z终使得单核的杂种细胞形成为细胞融合的基本过程。作为一种实验方法,在单克隆抗体的制备,膜蛋白的研究方面,细胞融合应用非常广泛。
融合细胞的选择
融合产物不同,其在培养条件下会存在差异。同源融合的原生质体以及未融合的原生质体对培养条件可以比较快的适应,而生成发育。由于异源融合体一般发育缓慢,优势生长的亲本原生质体融合细胞会对其有所YZ,发育成杂种的概率偏低。所以需要通过培养和筛选,将需要的杂种细胞分离出来,将不需要的细胞除去,从而使融合细胞的选择问题得以解决。
尚无筛选杂种细胞的特定规律可循,具体的筛选方案和选择体系需要针对不同对象来设计和制定。只允许杂种细胞生长或者对于杂种细胞优先选择,来对亲本细胞进行淘汰。
杂种细胞通过双亲细胞形态和色泽上的不同来进行识别为Z简单的选择方法,然而大多数的选择是以细胞生理遗传上的特性为依据。杂种细胞筛选较为常用的方法如下:
1、生长特性筛选
杂种细胞通过原生质体对培养基成分要求与反应的不同来进行选择。
2、物理特性筛选
杂种细胞通过亲本的原生质体大小、颜色、漂浮密度及电泳迁移率形成的愈伤组织的不同来选择。
3、遗传互补筛选
一亲本的缺陷利用另外一亲本贡献一个功能正常等位基因来进行纠正,从而通过杂种细胞有正常功能表现的原理来对杂种细胞进行选择。
4、抗体互补筛选
杂种细胞通过亲本原生质体对抗生素、除草剂及其他毒性物质抗性差异来选择,这种方法也能够用于抗药性有差异或抗性突变体。
5、其他方法
单个异核体也可以采用显微操作技术分离出来进行培养。由于若为融合细胞,那么与双亲本不同的荧光标记就必须具备,因此,采用无毒的荧光素标记双亲原生质体这一普遍适用的方法被科学家发明出来。融合后融合细胞利用一种电子荧光激活选择器来自动分类和选择。
以上方法中利用选择性培养基是一个很常用的杂种细胞选择方法。
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