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转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白Z常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白GX、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。,因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。
操作步骤:
1、转膜时,1张5.5×8.5cm的PVDF膜以及2张6.5×10cm的滤纸需要被准备,由于膜会受到手上的蛋白的污染,必须要戴手套切滤纸和膜。在甲醇中浸没切好的PVDF膜超过15秒即可。
2、将浸过的PVDF膜、两张滤纸、两块海绵垫以及转膜用的夹子放置于加有转移液的搪瓷盘里。
3、将夹子打开,在转膜液中放入黑的一面,海绵、滤纸、分离胶、PVDF膜、滤纸、海绵由下往上依次放入。
4、合好夹子,放入转移槽中,使夹的白面对着槽的红面,夹的黑面对槽的黑面,将电接通,电转移时会有热产生。有较大空隙在槽的一边,降温将事先准备好的冰盒放入。在一个大的盛满冰的容器中放入整个电泳槽(建议使用大的塑料泡沫盒子)。
注意:
1、在转膜液中进行整个过程,在铺每一层时,气泡要用刮子赶掉,一定不能有气泡留在胶与膜之间。
2、要轻轻地撬玻璃板剥胶,用刮子轻轻刮去浓缩胶,将分离胶小心剥下,往滤纸上盖,用手调整使其与滤纸对齐。
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