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毛细管电泳仪通过弹性石英毛细管作为分离通道,通过高压直流电场作为驱动力,以样品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和分配行为的差异为根据,从而使分离各组分得以实现。下面就让小编带你了解一下毛细管电泳仪的工作原理,基本构造以及特点。
工作原理
将电解液装载于毛细管电泳柱中运行时,因为管壁存在硅羟基,而使电渗流产生,整个毛细管柱内的溶液在电渗流的推动下进行定向移动。其其分离原理不是以组分在流动相和固定相中分配系数为基础,而是基于电场作用下离子迁移速度的差异是其和一般色谱技术的主要分别。
基本构造
直流高压电源、毛细管、电极和电极槽、冲洗进样系统、检测系统和数据处理系统等为毛细管电泳仪的主要部件。与毛细管内相同的背景缓冲液装于两个缓冲液瓶。在两个缓冲液瓶中放置毛细管的两端,在两个缓冲液瓶中分别插入铂金电极。为了避免
在实验过程中,应保持两个缓冲液瓶内的背景电解质溶液在同一液面水平,并且也应在液面下同一深度插入毛细管两端,毛细管两端由于压力差而使虹吸效应产生造成溶液的流动,从而对分析结果产生影响。在实验过程中,两个缓冲液瓶内的背景电解质溶液应保持在同一液面水平,并且毛细管两端也应插入到液面下同一深度。
1.毛细管柱:
通常是圆管型,应当为化学和电惰性的,能够透光,有一定柔性,弯曲比较容易。
内径:内径低于140微米,有比较好的散热,目前25-75微米之间为经常使用的。
材料:
(1)石英:Z常用,包括天然和人造两类,二氧化硅为基本成分。
(2)玻璃:Z强的电渗,然而有杂质。
(3)聚四氟乙烯:能够透紫外光,非常弱的电渗。缺点是管子没有均匀的内径,对样品有吸附,热传导差等。
2.检测器:
紫外或激光诱导荧光检测器.
3. 高压电源:
0-30千伏;200-300毫安
4.进样技术:
气动进样又叫做压差进样,进样端加压,出口端减压,虹吸作用)和电动进样。
5.常用的CE缓冲体系
特点
1.较为广泛的应用范围(无机离子到整个细胞)
2.较好的重现性
3.较高的进样准确性
4.GX(每米塔板数为十万、百万、千万)
5.高速(几十秒内完成)
6.灵敏度.高(10-10mol)
7.样品用量少(纳升)
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