液相色谱仪使用和注意事项

液相色谱仪属于高精度、比较贵重的分析测量仪器。它的更新速度较快，要求检验人员掌握较高的专业操作技术，因此在检验中要认真仔细，多加思考，不断总结经验教训，在工作中边检边学，逐步提高检验水平，提供准确可靠的检验结果。在日常使用中必须由专业技术人员严格按照相关的操作规程来使用，以免不正规的操作造成检验结果失准或者仪器损坏。

液相色谱仪启动前的检查

1、流动相的制备要与装置相适应

流动相必须经过过滤：在送液泵内。为了防止杂质和颗粒进入流路，要装有0.45um的吸滤器，否则会导致流路污染。使仪器工作不正常。

(1)流动相恢复到室温后使用：流动相温度与室温相差时。容易产生气泡。导致仪器基线很难稳定：特别是发生漂移后。一定要使流动相恢复到室温后再使用。

(2)流动相务必进行脱气：使用液相色谱仪时遇到的麻烦就是流动相产生气泡。这会引起泵输液不畅和检测器产生噪声和漂移。

(3)检查溶剂瓶内吸滤器是否堵塞：溶剂的质量或微生物的生长会堵塞吸滤器。从而影响液相色谱系统的正常运行。

有效防止液相色谱仪吸滤器堵塞的方法：①若需使用含盐的流动相，使用前务必过滤；②流动相若为蒸馏水或含盐的缓冲液，建议现用现配；③尽量避免溶剂瓶在阳光下暴晒。

液相色谱仪吸滤器堵塞后的处理方法：①取下吸滤器滤头，放在(1：4，v/v)硝酸溶液烧杯中超声清洗15min；②取出后用蒸馏水超声清洗10min；③用吸耳球吹出过滤头中的液体；④再换蒸馏水超声清洗10min；⑤用吸耳球吹出过滤头中的水分：将吸滤器滤头重新放入溶剂瓶中(正相系统注意将吸滤器滤头烘干再使用)。

(4)更换流动相时应注意的事项

①更换有互溶性的流动相时：a.将吸滤器部分放入准备更换流动相的烧杯中边震动边清洗。更换烧杯中的流动相直至清洗干净：b.打开排液阀。按清洗键清洗泵中的流动相。c.然后将吸滤器部分再放人流动相瓶内。关闭排液阀，在较短时间内清洗流路。d.Z后连接柱和检测器，清洗整个分析流路。

②更换无互溶性的流动相时：准备与新旧流动相具有互溶性的中间清洗液。首先换成中间清洗液。然后再把中间清洗液换成新的流动相。每次更换顺序都要遵循前述的a-d的顺序。

③更换缓冲液的流动相时：在新旧流动相的任一方或双方使用缓冲液时。准备蒸馏水做中间清洗液。首先用蒸馏水置换整个流路，然后更换成新的流动相，防止缓冲液中的盐析出。

2、输液泵

(1)如果液相色谱仪进液管内不进液。使用注射器吸液：发现进液管内不进液或有大气泡时。打开排液阀，用注射器从排液管中吸液。若空气量太大。有时用泵的清洗功能也无法彻底清除空气。

(2)通常在液相色谱仪输液前进行流动相的清洗：例如。停机夜间的温度与白天相差大时。或几天未开机时。有时在泵头内会产生气泡。如果不清除就输液。会由于气泡不能脱出而造成输液不畅。因此。需进行5min的清洗。以便排出气泡。

3、六通阀

(1)样品溶液进样前必须用0.45um滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。

(2)转动阀芯时不能太慢。更不能停留在中间位置。否则流动相受阻。会使泵内压力剧增。甚至超过泵的Zda压力。再转到进样位时。过高的压力将使柱头损坏。

(3)为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗。或先用能溶解样品的溶剂冲洗。再用水冲洗。

4、自动进样器

(1)确认清洗液：自动迸样器的清洗液，请使用与流动相相同的液体。但是含盐分时必须清除盐分。另外，清洗液在六通阀内与流动相接通。这时须注意盐分不要析出(盐的析出是造成堵塞的原因)。

(2)清洗液脱气：自动进样器的清洗液，也是封入在样品计量部分的溶剂。其在连续运转时会产生气泡导致误差，必须使用脱气装置进行脱气。

(3)必须净化清洗液：例如，停机夜间的室温与白天相差较大时。或几天未开机时，清洗液的流路中会产生气泡，如不除去气泡就进行分析，进样量会产生偏差，因此，在等待基线稳定的时间内，应进行清洗，排出气泡。用吸液器从排液器彻底吸引(启动注水)后。关闭排液。进行清洗。

液相色谱仪启动后(等待稳定后时)的检验

1、液相色谱仪漏液的噪声和基线漂移

确认在分析条件下装置启动后。液体流动的部分以及液体流过的部分全部不漏液。如有漏液。要把漏液处系紧或更换零件。

2、泵的压力的检查

液相色谱仪输液泵的压力必须稳定。才能取得良好的分析结果。根据需要的压力和流动相种类的不同有所差异，但变动幅度在0.5MPa以内为正常。若压力变动大再清洗1次，如还是不行，则应考虑单向阀内部是否污染。试按下述操作进行：

(1)关闭排液阀，取下进液管的过滤器，从这里用吸液器将流动相强行压入(脏物粘在单向阀的内部时有效)。

(2) 按使用说明书中所列的异丙醇进行清洗。

(3)试更换单向阀(应有备用件)。

3、基线噪声和基线漂移的检查

在检查液相色谱仪基线噪声和基线漂移时。Z好选择没有进样时的空白运行基线。常见的几种现象和处理方法：

(1)液相色谱仪基线噪声异常大时：可认为是检测池中进入气泡未脱出。气泡脱出不净时，可能是检测池被污染。按使用说明书所述的检测池清洗方法进行清洗。并检查灯的亮度。亮度低时更换灯泡。

(2)出现基线漂移和不规则波动时：分段检查色谱柱、流路配管、进样器、检测池、泵及流动相等可能受到污染的部件。如污染，必须进行彻底清洗。

(3)产生规则的(周期性的)波动时：可考虑空气调节器的风直吹在检测器上。或由于空调设备性能造成室温变化所致等。

液相色谱仪分析结束后的工作

1、色谱柱的清洗

在一段时间内不进行分析时。建议清洗色谱柱。并将其从装置上卸下：种类不同的色谱柱，清洗的方法也不同。必须按色谱柱的使用说明书确认。存放时。色谱柱内应充满溶剂(甲醇或乙腈)。两端要封死。色谱柱要轻拿轻放。

2、装置的清洗

使用缓冲液时。液相色谱仪分析完后必须用水洗净。一段时间内不使用时。色谱柱清洗后将柱卸下。与色谱柱连接的出入管道。用联接器进行短路连接，清洗流路。为防止流路内部发霉或产生细菌。建议用异丙醇、甲醇等清洗流路后进行封存。洗净后进液过滤器和检测器出口管道浸泡在装有清洗液的容器中。以防干燥。

结束语

液相色谱仪是分离分析技术的核心，对我国食品检验的工作起着非常重要的作用。因此，我们要加大对液相色谱仪使用和注意事项的重视，保证食品的质量安全。