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毛细管电泳所用的石英毛细管柱,在pH>3情况下,其内表面带负电,和溶液接触时形成一双电层。在高电压作用下,双电层中的水合阳离子引起流体整体朝负极方向移动的现象叫电渗。粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电渗流(EOF)两种速度的矢量和。正离子的运动方向和电渗流一致,故Zxian流出;中性粒子的电泳速度为“零”,故其迁移速度相当于电渗流速度;负离子的运动方向与电渗流方向相反,但因电渗流速度一般都大于电泳流速度,故它将在中性粒子之后流出,从而因各种粒子迁移速度不同而实现分离。
可能原因:毛细管堵塞或断裂。
解决方案:用水冲洗毛细管,观察是否有水流出。若无水流出,拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂,可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤,将样品过滤或离心去除其中的颗粒。
可能原因:缓冲液中有气泡产生或区带中样品析出。
解决方案:将缓冲液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是区带中样品析出,可降低样品浓度。对于在缓冲液中溶解度不高的样品,需在缓冲液中加入添加剂。
可能原因:样品进样量过大。
解决方案:减少进样量。
可能原因:样品浓度过低。
解决方案:使用高浓度样品测试,如果无法解决则有可能是以下其它原因。
可能原因:检测波长设置不正确。
解决方案:确认被分析物的特征吸收,检查检测波长设置。
可能原因:分离极性错误。
解决方案:对于蛋白质样品,注意蛋白质在分离条件下其PI和所带电荷。对于核酸样品,通常条件下会带负电荷。
可能原因:样品在毛细管内壁吸附。
解决方案:对于蛋白质和核酸样品,应尽量采用涂层毛细管、极端pH条件或动态涂层,防止样品吸附。
可能原因:光学检测器或光纤损坏。
解决方案:进行标准样品测试,如果没有对应结果出现,则可能存在硬件问题。
解决方案:打开毛细管检测窗口或调整窗口位置。
解决方案:对于蛋白质和核酸样品,应尽量采用涂层毛细管、极端pH 条件或动态涂层,防止样品吸附。
解决方案:重新切割毛细管入口。
解决方案:采用缓冲液作为样品溶剂。
可能原因:样品浓度太大。
解决方案:可降低样品浓度或减少进样量。
可能原因:样品本身性质不均一。
解决方案:此原因主要是针对蛋白质样品,小分子样品发生的概率较低。
可能原因:缓冲液与毛细管内壁平衡较慢。
解决方案:每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管。
可能原因:样品中物质易在毛细管内壁吸附。
解决方案:首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH溶液短时间冲洗毛细管,观察迁移时间能否重复。如果效果不佳,使用涂层毛细管或将样品再次处理。
可能原因:缓冲液不稳定、易电解或样品在原缓冲液条件下不稳定。
解决方案:更换其它种类的缓冲液。
可能原因:样品中物质易在毛细管内壁吸附。
解决方案:采用涂层毛细管或对样品进行前处理。
可能原因:毛细管内缓冲液流出,造成电流泄漏。
解决方案:更换毛细管,并用水清洗光纤头和检测窗口。
可能原因:实验环境湿度过大。
解决方案:使用抽湿机或空调。湿度过大时,可在仪器关闭时放置干燥剂,但仪器运行时一定要将干燥剂取出。
可能原因:瓶颈处有液体,导致瓶塞易滑。
解决方案:向瓶中装液体时不要过满,也不要沾湿瓶颈。
可能原因:压力系统存在问题。
解决方案:检修。
可能原因:毛细管入口切口不平齐。
解决方案:重新切割毛细管入口。
可能原因:若电动进样可保持重现,则压力控制或气路存在问题。
解决方案:检修。
解决方案:换瓶盖。
解决方案:将电极拉直。
解决方案:严格按安装顺序安装。
解决方案:检修。
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