酶标仪的原理|分类|应用|选购

　　酶标仪即酶联免疫检测仪，是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量。

　　酶联免疫吸附试验方法简称酶标法，是标记技术中的一种，是从荧光抗体技术，同位素免疫技术发展而来的一种敏感，特异，快速并且能自动化的现代技术。

　　酶标法的基本原理是将抗原或抗体与酶用胶联剂结合为酶标抗原或抗体，此酶标抗原或抗体可与固相载体上或组织内相应抗原或抗体发生特异反应，并牢固地结合形成仍保持活性的免疫复合物。当加入相应底物时，底物被酶催化而呈现出相应反应颜色。颜色深浅与相应抗原或抗体含量成正比。

　　由于此技术是建立在抗原-抗体反应和酶的GX催化作用的基础上，因此，具有高度的灵敏性和特异性，是一种极富生命力的免疫学试验技术。

　　酶标仪就是应用酶标法原理的仪器，酶标仪类似于一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。

　　光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，Z后由显示器和打印机显示结果。

　　微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X，Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单。

　　微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。其常见规格有40孔板，55孔板，

　　酶标仪是对酶联免疫检测实验结果进行读取和分析的专业仪器，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中。酶标仪分类方式一般可以按照滤光方式的不同和功能的不同进行划分。

　　酶标仪按照滤光方式的不同可分为：滤光片式的酶标仪和光栅式酶标仪。酶标仪按照功能可以分为：光吸收酶标仪，荧光酶标仪，化学发光酶标仪和多功能的酶标仪。

　　滤光片式的酶标仪：

　　采用滤光片来进行波长的选择，酶标仪内置滤光片轮，可选择试验所需的不同波长的滤光片来进行分光，光源发出的全波谱光经过滤光片后，大部分被过滤，只剩下滤光片本身允许的波长通过，这样就可就通过滤光片来获得特定的波长。

　　优点：通过选择不同的滤光片可获得不同的波长。

　　缺点：因滤光片固定所以波长都是固定，并且滤光片价格比较昂贵。

　　光栅式酶标仪：

　　采用光栅进行分光，光源发出的全波谱光线经过光栅后，通过光栅上面分布的一系列狭缝的分光，就可以获得任意波长的光，波长连续可调，一般递增量为1nm。

　　优点：使用方便灵活，可以进行全波长的扫描。

　　缺点：价格贵。

　　光吸收酶标仪：

　　用来进行可见光与紫外光吸光度的检测。特定波长的光通过微孔板中的样品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系，由此可以用来定性和定量的检测。

　　优点：检测检测技术成熟，成本低，操作简单。

　　缺点：动态范围窄，灵敏度比较低，特异性不强。

　　荧光酶标仪：

　　用来进行荧光的检测。通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上后，会发出波长更长的发射光，通过发射光栅后到达检测器。荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。

　　优点：灵敏度高，可实时检测，使用方便，检测模式多样。

　　缺点：易受外界干扰，激发光与发射光容易互相影响。

　　化学发光酶标仪：

　　酶标仪根据生物化学反应中的自发光，可分为辉光型和闪光型两种类型。辉光型发光持久，

　　酶标仪在实验室中的应用越来越普及，酶标仪的检定也就越来越重要。酶标仪的检定内容主要包括干涉滤光片波长误差及重复性、吸光度误差、稳定性和重复性、仪器灵敏度、通道差异及吸光度的线性。

　　吸光度示值稳定性(r)的检定：

　　选用492nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值为1.0A的光谱中性滤光片，平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，测量并记录酶标仪的初始吸光度示值(A0)，5min、10min后分别再测一次。吸光度示值稳定性(r)计算：r等于后两次吸光度示值的Zda值与A0的差。

　　波长示值误差和波长重复性的检定：

　　从酶标仪取出仪器所用有标称波长(λ)的干涉滤光片(405，450，492，620nm)，使用波长示值误差优于±0.5nm的分光光度计，将干涉滤光片用1mm左右铜或铝金属丝悬挂固定于分光光度计比色杯架第二孔右外侧，干涉滤光片平面需与入射光束垂直。以1nm的改变幅度，从低到高，检测各干涉滤光片在(±20)nm范围内的透射比，绘制波长一透射比特性曲线，求出峰值波长(λi)，每片干涉滤光片重复检测三次并求峰值波长均值。

　　干涉滤光片波长示值误差(△λ)计算：△λ=峰值波长均值-λ;波长重复性(δλ)计算：δλ等于三次检测峰值波长Zda值和Z小值之差。

　　吸光度示值误差的检定：

　　先将吸光度标称值(A)分别为0.2，0.5，1.0，1.5的四块光谱中性滤光片(分光光度计附件)，在分光光度计上依次选用405，450，492，630nm波长或酶标仪特有的专一波长，以空气为参比，检测光谱中性滤光片的吸光度。每个滤光片每个波长检测三次，取均值作为该片在该波长下的吸光度标准值(As)。然后，将四块光谱中性滤光片同时平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，酶标仪连续测量3次，依次记录仪器吸光度示值，并计算平均值(Ax)。

　　吸光度示值误差(△A)计算：△A=Ax-As，

　　酶标仪可对以微孔板为体系的实验提供多种不同模式的检测。通常，酶标仪至少可提供“吸收光”、“荧光”、“发光”三种不同的检测模式。我们总是希望自己的酶标仪可以长时间使用，那怎么样增加其使用寿命呢?

　　1、酶标仪应放置在无磁场和干扰电压，低于40分贝的环境下;

　　2、应避免阳光直射以防止设备老化;

　　3、操作时环境温度应在15℃-40℃之间，环境湿度在15%-85%之间;

　　4、运行中操作电压应保持稳定;

　　5、操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘;

　　6、保持干燥、干净、水平的工作台面，足够大的操作空间;

　　7、使用加液器加液，加液头不能混用;

　　8、尽量配套使用洗板机洗板，这样洗的干净，有效避免交叉污染;

　　9、严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确;

　　10、在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手;

　　11、请勿将样品或试剂洒到酶标仪表面或内部，操作完成后请洗手;

　　12、如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害;

　　13、如果酶标仪接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒;

　　14、不要在测量过程中关闭电源;

　　15、对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到Z佳效果;

　　16、使用后盖好防尘罩;

　　17、出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。

　　1、酶标仪的拆装

　　用胶纸固定好酶标板盖板。分别关闭酶标仪、打印机电源开关，拔除电源线。用螺丝刀拆除打印机电缆。在一干净平整的台面上放一柔软绸布，将酶标仪反过来放置于绸布上，以防止损伤酶标仪塑料上盖外表面。用十字螺丝刀取下固定上盖的螺丝。酶标仪正面朝上，掀开上盖，露出酶标仪内部，依据需要拆除相应部件。

　　2、更换灯泡

　　松开酶标仪前端中部的一颗螺钉，掀开酶标仪

　　酶标仪在临床实验方面应用广泛，可以说它是临床及医学实验不可或缺的基础设备。任何仪器在使用时往往都会出现一些小故障，酶标仪仪器也一样，酶标仪在使用的过程中出现故障后如何解决呢?

　　1、酶标仪开机后无反应

　　故障分析：出现这种情况请检查酶标仪电源线是否接好，保险丝是否烧断。

　　2、酶标仪开机电源指示灯亮，液晶显示屏能显示字符，但显示时间较短

　　故障分析：导致此种现象有两种可能，一是液晶显示器驱动、控制电路出现故障;二是供给液晶显示器的电源电压不正常。

　　故障排除：打开酶标仪上盖，通电观察，散热片是否发热，若发热，则用数字万用表直流电压档测三端集成稳压块输出端，观察有无电压输出;若没有，说明电源有故障。由于三端集成稳压块内含过流限制和过热保护电路，为了判断是三端集成稳压块的故障还是后级负载短路引起的故障，可将酶标仪母板上三块电路板逐一拔出，通电再测量三端集成稳压块输出端电压，若拔出液晶显示驱动—控制这块电路块时，三端集成稳压块的输出端电压恢复正常，则可初步判断是电路板上的负载有短路现象。检查该电路板直流供电系统的各个元器件，可能为以树脂壳包装的铝固体电解电容器已击穿造成短路等原因。换上相同规格的电解电容器，即可排除故障。

　　3、酶标仪测量的结果重现性不好，即使用空板测量误差也在允许的范围之外

　　故障分析：检查试剂、判定公式以及光路是否被污染。排除这些问题后，检查微板的卡簧是否卡到位，没有卡到位会造成微板在测量时在机内晃动影响测量结果不准。

　　4、酶标仪测量结果OD值偏低

　　故障分析：可能是酶标仪灯的能量值偏低，在排除完灯的能量值偏低后，可能是滤光片上有灰尘，用蒸馏水和擦镜纸擦洗干净晾干后故障排除。

　　5、酶标仪调不出所编程序

　　故障分析：程序必须在相应程序模块下调出，如在临界值模块下编辑储存的程序必须要在临界值模块下调出。

　　6、肉眼结果与酶标仪测定结果差异较

　　酶标仪主要应用于酶联免疫吸附检测反应中检测吸光度值，其用途主要应用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。

　　1、酶标仪检测细菌溶液浓度

　　在微生物发酵时，及时检测发酵时的菌液浓度来控制工艺很必要。传统用稀释平板计数法、比浊法、血球计数板计数法等来检测菌液浓度。这些方法工作繁重，误差较大，无法达到实时监测。

　　分光光度法是利用物质能够吸收一些在紫外-可见光区的光，来对物质定性、定量分析，该法在医学、材料等领域应用很广。但该法设备简单、准确度高、精密度好;也存在工作量大，操作繁琐，耗时长等缺点。

　　酶标仪是测定酶联免疫反应的一般仪器，其原理与分光光度法类似，酶标仪具有检测快捷、微量、批量操作等优点。和分光光度法比，酶标仪一次性可测多个样本，操作简单，能减少工作量，节约时间。

　　2、酶标仪测定食用菌中多糖含量

　　按照农业行标的方法提取多糖，显色之后，用酶标仪代替农业行标中所用的分光光度计，测定多糖的吸光值，结合标曲，确定多糖的含量，并对该法的精确性进行了评估。结果表明，酶标仪法的线性范围良好、稳定性、可重复性和精密度较高。而且，酶标仪操作更为简单，减少了繁琐的更换和清洗比色皿，同时，可在一分钟内完成数十个待测样品的测定，具有明显的优势。

　　3、酶标仪比色法测定血清中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量

　　当前检测血清中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)方法众多，优劣各异，分化学、酶、色谱法三类。化学法的操作繁琐、技术含量高而在常规工作应用受限;色谱法在建立标准方法和参考物质的准确制备与定值很有用，但费用昂贵、样品处理复杂，难以普及。酶法中分手工、半自动、全自动检测，手工法需要大量试剂、成本高，半自动、全自动需要相应的仪器，仪器价格不菲，基层无法普及。

　　酶标仪比色法测定血清中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量结果表示:TG

　　酶标仪可分为普通酶标仪，多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等。面对类型如此众多的酶标仪，实验室在选择时往往有难以适从的感觉。那么酶标仪具体用如何选购呢?

　　实验室在选择酶标仪时，一般应遵循这样几条原则：

　　1、根据工作需要选择

　　切忌刻意去求功能多，因为如果酶标仪功能过多，易出故障;有些功能如酶标动力学或凝集等，可能根本就用不上。

　　如果选购的酶标仪主要是用于定性测定，则不必要求wan美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统是对工作量比较大的血站或大型医院较为适用，对于日常工作量不太大的实验室，就无必要。

　　2、根据酶标仪的性能选择

　　反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围，滤光片配置，检测速度，吸光度范围，线性范围，分辨率，准确度，精密度等。

　　3、根据酶标仪的尺寸选择

　　酶标仪体积不宜太大。检验室空间有限，仪器体积太大会占据很多空间，给其他工作带来不便。这也是小巧玲珑、外形美观的机型受人青睐的原因。此外，在检验过程中，经常会有样品液体外溅，所以酶标仪外壳要易于消毒、清洁。

　　4、根据酶标仪的操作复杂程度选择

　　酶标仪操作要简便，菜单应该用中文来显示。尽管目前检验人员的素质有限大幅度提高，懂英语的人也为数不少，但看中文毕竟比看英文更方便、更明确。

　　而且进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话，对于英语上有困难的实验室，应尽可能选用此类酶标仪。

　　5、根据酶标仪的价格选择

　　酶标仪品种类型多，由于性能不一，价格自然也就相差较大，实验室可根据自己的财力去选择性能/价格比较为合适的酶标仪。

　　6、根据酶标仪的售后服务选择

　　酶标仪需要日常维护和保养，要保证其始终获得准确的检测结果，还应定期进行校正。这要求厂商能提供优质的售后服务，解除用户的后顾之优。

　　而且，需要厂商可配置易损部件。酶标仪在临床上使用频率较高，一些部件的损坏率也较高，如放酶标仪的