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高通量组织研磨仪针对中药药材DNA提取的研磨方法
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2016-09-19 00:00 1594阅读次数
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高通量组织研磨仪针对中药药材DNA提取的研磨方法
更多资料
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2016-09-19 00:00
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实验操作
针对航空运输危险品的测试方法 针对航空运输危险品的测试方法[详细]
2024-09-14 21:11
应用文章
土壤DNA提取 腐殖酸的污染。土壤中，特别是森林，草地土壤含有非常丰富的腐殖酸。腐殖酸是一系列的有机物分子，部分分腐殖酸同核酸分子非常类似，在纯化过程中非常难于去除。微量的腐殖酸污染都会导致下游应用，如PCR，酶切的失败。裂解方法。土壤样品中含有各种微生物，如细菌和真菌等。革兰氏阳性细菌和真菌都含有非常厚的细菌壁，让这些微生物的细胞壁有效破裂是提取高产量宏基因组DNA的关键。由于土壤样品的复杂性，使用酶法（如溶菌酶，破壁酶，蜗牛酶）或液氮研磨都不可行，因为土壤中含有各种金属离子或YZ因子导致消化酶的活性失活，或土壤中的沙粒等会导致液氮研磨很难进行。土壤DNA提取的解决简介土壤样品含有大量的微生物，其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取DNA是研究土壤微生物Z为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物DNA的方法主要有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中，经过有效的破壁方法使微生物的DNA全部释放到裂解液中，然后再进行分离提取，如Zhou的方法。间接法是指将土壤放在一种的缓冲液中，如BufferPBS等，把微生物从土壤中分离出来，然后再进行DNA的提取。间接法可大大降低土壤中腐殖酸，重金属盐对DNA提取带来的影响，但是这种方法会丢失许多微生物，得到的DNA并非土壤样品中的全基因组（宏基因组），目前已经很少研究者会采用这种方法。从土壤样品中直接提取DNA可Zda可能性地获得全基因组，但是这种方法却面临以下几个问题：1.2.3.DNA得率难于控制。土壤样品或因肥沃，或因贫瘠，或因含水量丰富，或因干枯，或因取样的深浅度，都会造成微生物数量和品种发生剧烈改变。在一个小范围的土壤样品DNA含量往往会差别成千上百倍。此外，某些土壤中含有的化学成分，如重金属盐，粘土物质都会造成DNA得率降低。OmegaBiotek公司的E.Z.N.A.SoilDNAKit是目前土壤DNA提取Z为优化的试剂盒。该试剂盒采用玻璃珠研磨法和热激化学破壁法，可不需特殊的珠磨仪，在点动涡旋仪就可进行，适合于广大的研究室。试剂盒中HTRReagent是OmegaBiotek公司du家开发的腐殖酸吸附剂，能GX去除各种腐殖酸的污染。此外还采用无醇的硅胶柱纯化方式，可GX去除土壤中各种可溶性金属盐，以及其它可溶性的YZ因子。该试剂盒已经成功地提取如下土壤（部分是客户反馈）：自然保护区森林的土壤（长达30-40年森林土壤，表层有30-50cm落叶层），红树林土壤，草地，耕地，海底泥，污泥，矿石区泥土，有机物污染的泥土，池塘泥，垃圾泥，空调管道堆积物等。实验方法为表明该试剂盒的优势性，我们选择以下不同组织样品进行DNA提取实验，每个样品重复3次。l森林类样品：自然保护区森林土壤（广东黑石顶自然保护区）和海南岛红树林保护区l矿石区样品：矿石区水底土壤（湿）和矿石区地表土壤（干）l耕地样品：稻田土壤，菜地土壤l有机物污染地表样品：污水沟衍泥和生活垃圾堆放区操作方法（按SoilDNAKit试剂盒进行）简单描述以下：1.取▲0.5g森林土壤/耕地土壤，或◆4g矿石区土壤和有机物污染土壤至15ml离心管中；2.加入▲0.5g酸洗玻璃珠，或◆4g酸洗玻璃珠；3.加入▲1mlBufferSXLMLus，或◆8mlBufferSXLMLus；4.立即在涡旋仪上Z高速涡旋3分钟。5.加入▲100ul，或◆800ulBufferDS，涡旋15s混匀6.转移至预热至70oC水浴锅中，水浴10-15分钟。7.3000xg离心3分钟，转移▲800ul，或◆7ml上清，并加入▲270ulBufferSP2或◆2.3mlBufferSP2，涡旋混匀；8.▲10,000xg离心5分钟，或◆5，000xg离心10分钟；9.把上清液转称至新的2ml/15ml离心管中，加入0.7倍的异丙醇。（在处理矿石区样品时和有机物污染的样品中，还加入133ul糖原溶液），涡旋混匀；10.▲10,000xg离心5分钟，或◆5，000xg离心10分钟沉淀收集DNA。11.倒弃上清液，并反扣于吸水纸上5分钟；12.加入200ulElutionBuffer，涡旋5秒。65℃水浴20-60分钟，让DNA充分溶液。13.加入50ulHTR,反应2min后，离心，取上清。14.上清加入等体积（约200ul）XP2Buffer，均匀后上柱。15.加入300ulXP2Buffer，洗涤一次。16.加入700ulSPWWashBuffer，洗涤两次。17.空甩后，加入适当量的ElutionBuffer洗脱即可。实验结果1.DNA电泳结果取10ul纯化的基因组DNA上样于0.8%琼脂糖凝胶，80V电泳30分钟，结果如下。0.5g森林类土壤样品（前两个自然保护区森林土壤，后两个为红树林土壤）0.5g耕地类土壤样品A:水稻田土壤B:玉米土壤4g有机物污染土壤样品A:生活垃圾堆放地B:污水沟底泥4g矿石泥1和3是两个矿石区水底土壤（湿）2和4矿石区地表土壤（干）相关附录【omega】基因组DNA抽提试剂盒系列 Se全血DNA小量提取试剂盒：从小于1ml血液样品中纯化2-30ug淋巴细胞基因组DNAD3471-00SEBloodDNAKit（20）150D3471-01SEBloodDNAKit（50）300D3471-02SEBloodDNAKit（200）1000全血DNA小量提取试剂盒：从小于250ul血液样品中纯化2-30ugDNA，包括寄生的病毒等基因组DNAD3392-00BloodDNAKit（5）108D3392-01BloodDNAKit（50）720D3392-02BloodDNAKit（200）2610全血DNA中/大量提取试剂盒：从小于10ml、20ml血液样品中纯化200-250ug或400-600ug基因组DNAD3494-01BloodDNAMidiKit（10）495D3494-03BloodDNAMidiKit（50）2250D3494-04BloodDNAMidiKit（100）4320D2492-01BloodDNAMaxiKit（5）450D2492-02BloodDNAMaxiKit（20）1710D2492-03BloodDNAMaxiKit（50）3600[详细]
2024-09-29 06:33
产品样册
赛默飞TSQ针对《ZG药典》版药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶的鉴别 引言阿胶、鹿角胶、龟甲胶均系常用的滋补药，在及中成药配伍方面占有极重要的位置，由于货源紧缺以致药材基源混杂和掺假现象时有发生。目前，针对这三种胶类真伪鉴别的方法有多种，但其认定的Z高标准则是《ZG药典》关于此类胶的规定。本实验严格参照《ZG药典》2015年版中药材阿胶、鹿角胶、龟甲胶的鉴别方法，应用三重四极杆质谱系统TSQEndura开发了药材阿胶、龟甲胶及鹿角胶的检测方法。[详细]
2018-08-10 10:58
产品样册
高通量组织研磨仪对指甲进行研磨提取微量元素实验效果-上海净信 高通量组织研磨仪对指甲进行研磨提取微量元素实验效果-上海净信[详细]
2024-09-20 00:04
应用文章
TL2010S动物组织研磨器研磨鸡淋巴组织的试验方法 TL2010S动物组织研磨器研磨鸡淋巴组织的试验方法[详细]
2024-09-18 02:53
选购指南
基因组DNA提取相关 基因组DNA相关基因组DNA提取试剂盒简介：DNA是遗传信息的载体，是Z重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中Z重要、Z基本的操作之一。Solarbio公司提供各种不同样品基因组DNA提取试剂盒，如植物、动物、细菌、细胞、血液、酵母等基因组DNA提取试剂盒。所提取的基因组纯度高，片段大小在50kb左右。用户可根据需要选用不同的试剂盒来进行不同样品的抽提。基因组DNA提取的原则：1、保证核酸一级结构的完整性（因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基础）。2、排除其它分子（如蛋白质、多糖、脂类、有机溶剂等）的污染，使下游试验顺利进行。基因组DNA提取的原理和方法：DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。1、样品预处理从各种不同来源的样品（如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等）中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及其成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取试剂盒说明书。部分样品预处理方式:植物材料液氮研磨动物材料匀浆、液氮研磨培养细胞蛋白酶K处理细菌溶菌酶破壁酵母破壁酶破壁、玻璃珠研磨血液红细胞裂解液去红细胞2、细胞裂解CTAB法：适用于植物组织、真菌等。CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。该复合物在高盐溶液中（>0.7MNaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、多酚等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。SDS法：适用于细菌、血液、酵母、动物组织、细胞等。SDS是一种阴离子去污剂，可溶解细胞膜，裂解细胞，使蛋白质变性、染色体解体。其它裂解方法：物理方式：机械剪切、超声波破碎、研磨匀浆等化学方式：异硫氰酸胍、碱裂解等酶法：蛋白酶K3、DNA分离纯化纯化要求：核酸样品中不应存在对酶（如核酸内切酶、DNA聚合酶等）有YZ作用的成分。其它生物大分子如蛋白质、多糖、多酚和脂类分子等污染应降低到Zdi程度。排除其它核酸分子的污染，如提DNA时应去除RNA，反之亦然。纯化方法：细胞破碎后，常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA，主要有硅基质材料、阴离子交换树脂和磁珠等。因硅基质材料可特异吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等，使得提取基因组像过滤一样简单，因此硅基质材料成为大规模分离纯化DNA的通用方法。硅基质材料吸附核酸的原理：主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理可能是高浓度盐离子破坏了硅基质水分子结构，形成阳离子桥，当盐被清除后，再水化的硅石破坏了基质和DNA之间的吸引力，因而DNA从硅基质上被洗脱下来。注意事项：尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。防止基因组DNA的生物降解，主要是DNase降解基因组DNA，DNase需二价金属阳离子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子螯合剂螯合Mg2+以YZDNase的活性。减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力（如剧烈振荡、搅拌等），细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和高温等。4、DNA洗脱收集DNA的洗脱效率取决于以下重要因素：洗脱液成分：采用硅基质膜吸附的DNA，可将DNA在低盐高pH值条件下洗脱下来。pH值在7.0-8.5之间洗脱效率较高，pH值低于7.0则洗脱效率很低。一般基因组提取试剂盒中的洗脱缓冲液就是TE（pH8.0），既为DNA从硅基质膜上洗脱下来提供良好的pH环境，其中的EDTA又能保证DNA不被DNase降解，同时由于EDTA浓度非常低，对核酸内切酶、DNA聚合酶的影响非常微弱，不影响后续实验，可放心使用。洗脱液体积：当洗脱液体积小于30ul时，洗脱效率很低且不稳定；当洗脱液体积在50-200ul时，洗脱效率稳定在80-90，并可保证得到Zda产量，因此洗脱液体积不能小于30ul。加洗脱液部位：100-200ul洗脱液能完全覆盖硅基质膜，DNA的洗脱量可得到保证，但当洗脱液体积较少如30-50ul时，须在硅基质膜中间部分悬空滴加洗脱液，以确保少量的洗脱液能完全覆盖硅胶膜。洗脱液的温度：在加洗脱液之前，先将洗脱液在60-75℃水浴中预热10分钟，可有效提高DNA的洗脱效率。洗脱时间和次数：加入预热的洗脱液后，可在室温放置2-5分钟使DNA完全溶解在洗脱液里通过离心而洗脱下来。同时可进行二次或三次洗脱，即将前次洗脱下来的洗脱液再上柱、离心，使前次没有洗脱下来的DNA再次溶解在洗脱液里，从而提高DNA的产量。5、DNA的定量及检测提取得到的DNA*片段需从分子质量、浓度、纯度等方面进行检测，从而判断DNA质量。用琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子质量：得到的基因组DNA*片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。Solarbio公司的基因组DNA提取试剂盒提取的不同材料基因组DNA*片段大小一般在50kb左右，能很好地满足后续试验的要求。通常用琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子质量时，以溴酚蓝为示踪染料，EB染色，紫外观察，并与DNA分子量标准对照即可判断所提DNA的平均分子量。高质量的基因组DNA应显示为单一条带，如DNA降解则表现为弥散条带。用紫外分光光度计检测DNA浓度和纯度：浓度测定：DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。以下简单介绍OD260的测定方法：所提基因组DNA样品=100ul进行OD260值测定的待测样品=20ul所提基因组DNA样品+180ulTE=200ulDNA稀释倍数=200ul/20ul=10倍如200ul待测样品OD260值=0.2待测样品浓度（即100ul基因组DNA样品浓度）=50ug/ml×OD260值×稀释倍数=100ug/ml所提100ul基因组DNA样品总量=100ug/ml×100ul=10ugDNA纯度测定：一般用OD260/OD280值检测DNA样品的纯度。正常OD260/OD280值约为1.7-1.9，说明DNA纯度较好；若OD260/OD280值小于1.7，说明可能有蛋白污染；若OD260/OD280值大于2.0，说明可能有RNA污染或DNA已经降解。注：因为pH值和离子会影响光吸收值，因此洗脱时如不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，OD260/OD280值会偏低，但并不表示纯度低。6、DNA的储存储存溶液：DNA为两性解离分子，在碱性条件下较稳定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分为：10mMTris-HCl（Tris与盐酸形成强的缓冲对）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二价金属阳离子，YZDNase的活性）；pH8.0（碱性条件可减少DNA的脱氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值为7.0，可作为DNA的储存液，但有些实验室制备的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0），这不仅影响DNA的洗脱效率，而且导致长时间保存的DNA容易发生降解。因此建议用TE作为DNA的长期储存液。储存条件：为避免DNA降解，提取的DNA应先进行分装，然后置于-20℃或-70℃保存，同时注意避免反复冻融造成DNA降解。[详细]
2024-09-29 11:52
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针对柴油类有机物的EPA 方法8015C EPA8015C是一套用于确定各种无卤挥发性有机化合物、半挥发性有机化合物和石油烃的浓度的气相色谱法。在这份应用报告中，我们采用Clarus690GC分析石油烃，特别是柴油类有机物（DRO）。Clarus690GC采用宽量程氢火焰离子化检测器（WR-FID），WR-FID所具有的大动态范围能够在单次色谱运行过程中检测高浓度和低浓度的分析物。TotalChrom色谱数据系统（CDS）软件将计算nC10和nC28之间的峰面积，从而准确地量化每个样品当中的DRO浓度。宽量程FID能够更灵敏地检测分析物，广泛地满足报告限度要求。[详细]
2018-08-17 10:00
产品样册
针对大型客车防雨密封性的试验方法 大型客车在做防雨密封性的试验，必须要有相关国家标注来进行对比。看是否能符合防雨密封性的特征，敬请大家关注相关国标的改动及其试验方法。[详细]
2018-10-13 10:00
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高通量组织研磨仪产品样册 高通量组织研磨仪产品样册[详细]
2016-10-20 09:08
产品样册
血液基因组DNA提取试剂盒 资料名称：血液基因组DNA提取试剂盒
适用产品：使用本试剂盒回收的D N A 可适用于各种常规操作， 包括酶切、P C R 、文库构建、Southern杂交等实验。
正文语言：中文
文件编号：BP024-1
文件版本：1.0
文件格式：PDF
文件大小：0.9MB
内容简介：本试剂盒采用酶裂解法裂解血液样本，适用于从新鲜、加抗凝血剂或冷冻的血液样本中提取基因组DNA。离心吸附柱采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，可特异性、GX、专一吸附DNA，可Zda限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。[详细]
2018-05-23 09:43
其它
土壤基因组DNA提取试剂盒 资料名称：土壤基因组DNA提取试剂盒
适用产品：适用于新鲜的土壤样本（如花盆土、农田土、花坛土、湿泥、河流沉积物等）中提取基因组DNA。
正文语言：中文
文件编号：BP028-1
文件版本：1.0
文件格式：PDF
文件大小：0.8MB
内容简介：本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，能够快速提取和纯化土壤基因组DNA，适用于新采取的土壤样本，如农田土、花坛土、湿泥等。本试剂盒采用独特的缓冲液系统，可将土壤样本中的腐殖酸等杂质尽量去除，经裂解后的DNA可GX结合到吸附柱上，残留的少量杂质可使用漂洗液进行去除，Z后使用洗脱液进行洗脱收集，获得高纯度的基因组DNA。用本试剂盒提取的土壤基因组DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建等分子生物学下游实验。[详细]
2018-05-23 16:29
其它
植物基因组DNA提取试剂盒 资料名称：植物基因组DNA提取试剂盒
适用产品：本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，能够快速提取植物基因组DNA，适用于从植物组织细胞中提取总基因组DNA，提取的基因组DNAZda长度可达到50 kb。
正文语言：中文
文件编号：BP029-1
文件版本：1.0
文件格式：PDF
文件大小：0.9MB
内容简介：本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，能够快速提取植物基因组DNA，适用于从植物组织细胞中提取总基因组DNA，提取的基因组DNAZda长度可达到50 kb。本试剂盒采用独特的缓冲液系统，可Zda限度的去除杂蛋白及其他有机物等杂质，经裂解后的DNA可GX结合到吸附柱上，残留的少量杂质可使用漂洗液进行去除，Z后使用洗脱液进行洗脱收集，获得高纯度的基因组DNA。用本试剂盒提取的植物基因组DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建等分子生物学下游实验。[详细]
2018-05-23 16:30
其它
土壤基因组DNA提取试剂盒 资料名称：土壤基因组DNA提取试剂盒
适用产品：适用于新鲜的土壤样本（如花盆土、农田土、花坛土、湿泥、河流沉积物等）中提取基因组DNA。
正文语言：中文
文件编号：BP028-1
文件版本：1.0
文件格式：PDF
文件大小：0.8MB
内容简介：本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，能够快速提取和纯化土壤基因组DNA，适用于新采取的土壤样本，如农田土、花坛土、湿泥等。本试剂盒采用独特的缓冲液系统，可将土壤样本中的腐殖酸等杂质尽量去除，经裂解后的DNA可GX结合到吸附柱上，残留的少量杂质可使用漂洗液进行去除，Z后使用洗脱液进行洗脱收集，获得高纯度的基因组DNA。用本试剂盒提取的土壤基因组DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建等分子生物学下游实验。[详细]
2018-05-24 10:22
其它
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高通量组织研磨仪针对中药药材DNA提取的研磨方法
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