全自动氨基酸分析仪操作指南

全自动氨基酸分析仪操作指南：从样品前处理到定量

1. 样品前处理：决定分析上限的核心环节

氨基酸分析的成败，往往在样品进入进样针之前就已经决定。对于常规蛋白质水解，通常采用酸水解法。

• 水解条件控制：将样品置于恒沸点6mol/L HCl中，在110℃条件下真空封管或充氮保护水解22-24小时。
• 敏感氨基酸保护：含硫氨基酸（半胱氨酸、甲硫氨酸）易被氧化，需在水解前加入过甲酸进行预氧化；色氨酸在酸性条件下几乎全毁，需单独采用6mol/L NaOH或对甲苯磺酸进行碱水解。
• 复溶与过滤：水解液蒸干后，必须使用pH 2.2的专用柠檬酸钠缓冲液复溶。样品上机前需经过0.22μm微孔滤膜过滤，防止颗粒物堵塞离子交换柱。

2. 关键运行参数与系统优化

3. 流动相与茚三酮试剂的管理

茚三酮试剂对光及空气极度敏感。操作时应确保储液瓶处于惰性气体（如高纯氮气）保护下。若茚三酮发生氧化，基线噪声将显著增加，直接影响检测限（LOD）。

• 缓冲液pH精度：离子交换色谱对pH值的敏感度极高，流动相pH值偏差±0.01就会导致组分保留时间的漂移。建议直接使用商品化配置好的缓冲液，以减少人工配制误差。
• 气泡排除：每天开机前应进行Pump Purge，确保管路内无气泡，防止由于流量波动导致的定量不准。

4. 定性分析与定量计算

分析仪通过保留时间进行定性，通过峰面积与标准品比对进行定量。

• 标准品校准：至少每运行20个样品应插入一个标准品序列。若保留时间偏移超过0.2min，需重新检查柱温稳定性或再生离子交换柱。
• 内标法的应用：为了补偿样品前处理中的损失，建议引入去甲亮氨酸（Norleucine）作为内标。
• 基线处理：在分析酸性氨基酸（如天冬氨酸）时，应重点关注起始基线的平滑度；在分析碱性氨基酸（如精氨酸）时，需注意最后一段高盐洗脱液带来的基线抬升。

5. 预防性维护与常见故障排除

• 柱压升高：多数情况是由于样品沉淀或缓冲液析出。可尝试使用0.2mol/L NaOH进行反向冲洗（注意需断开检测器），或更换柱头筛板。
• 灵敏度下降：检查反应器是否存在漏液，或茚三酮管路是否发生结晶堵塞。定期清洗柱后衍生系统的混合三通是维持系统稳定的必要工序。
• 分离度差：当Asp与Thr或Gly与Ala无法达到基线分离时，通常提示树脂性能下降，需执行树脂再生程序或考虑更换色谱柱。

全自动氨基酸分析仪的标准化操作不仅是点击“Start”键，更在于从样品降解防护、流动相pH微调到系统压力监控的全程管理。只有维持高度一致的运行环境，才能确保在复杂的科研及工业检测任务中输出的数据结果。