全自动氨基酸分析仪操作规程

全自动氨基酸分析仪：标准化操作流程与核心控制要点

在生物化学、食品安全及临床检测领域，全自动氨基酸分析仪凭借其高分辨率、高重复性的优势，始终是蛋白质组成分析及游离氨基酸检测的“金标准”。不同于普通液相色谱（HPLC），氨基酸分析仪通常采用离子交换色谱分离结合茚三酮柱后衍生法，这对操作的规范性和细节掌控提出了更高要求。

一、 样品前处理：检测精度之源

氨基酸分析的准确性，五分取决于仪器，五分取决于样品前处理。针对蛋白质或多肽类样品，通常采用酸水解法。

1. 水解过程：将粉碎均匀的样品置于水解管中，加入6mol/L的盐酸溶液，抽真空封口或充氮气保护，以防止含硫氨基酸（如半胱氨酸、蛋氨酸）被氧化。
2. 温度与时间：标准水解条件通常设定为110℃恒温水解22-24小时。
3. 过滤与调值：水解液需减压蒸干以除去盐酸，随后用缓冲液（如pH 2.2的柠檬酸钠缓冲液）复溶。上机前必须经过0.22μm微孔滤膜过滤，防止颗粒物堵塞离子交换柱。

二、 仪器开机与系统平衡

在启动全自动氨基酸分析仪前，必须确保洗脱缓冲液（Buffer）和衍生反应试剂（茚三酮）充足，且无气泡进入管路。

1. 系统预热：接通电源后，设定柱温箱（通常在50℃-75℃之间切换）和反应池温度（通常为130℃-135℃）。
2. 压力监测：启动泵流量，观察系统压力是否在正常范围内波动。若压力过高，需检查保护柱或在线过滤器是否堵塞；压力过低则可能存在漏液或泵内气泡。
3. 基线平稳：流路冲洗约30-60分钟，待吸光度信号（570nm与440nm）基线平稳、漂移率符合要求后，方可进行标准品注入。

三、 核心运行参数与列表参考

全自动氨基酸分析仪的运行依赖于精密的梯度洗脱程序。以下为蛋白质水解模式下常见的技术参数配置表：

四、 定标与定性定量分析

1. 标准品比对：利用已知浓度的氨基酸混合标准溶液进行定标。通过保留时间定性，峰面积或峰高进行外标法定量。
2. 线性回归：定期制作标准曲线。通常要求各组分的线性相关系数（R²）大于0.999。
3. 响应值漂移：由于茚三酮试剂易氧化且对光敏感，每24小时应至少运行一次校准标样，以补偿衍生效率的微小波动。

五、 常见水解条件下的回收率参考数据

在实际操作中，不同氨基酸对酸水解的耐受度不同。从业者通常会参考下表的回收特性进行结果修正：

六、 维护与停机保养规程

1. 柱头维护：实验结束后，严禁直接关闭泵。需切换至冲洗程序（如使用专用洗柱液），洗净柱内残留的缓冲盐。
2. 衍生泵保养：茚三酮管路若长期停机，需用乙醇或厂家指定清洗液置换，防止衍生剂沉淀结晶堵塞反应盘管。
3. 存储环境：离子交换柱需在指定pH值的保存液中封存，并存放在4-10℃环境下，避免树脂失水或霉变。

作为实验室精密分析的核心环节，全自动氨基酸分析仪的操作不仅是技术活，更是细节活。严格遵循SOP规程，不仅能延长昂贵的色谱柱寿命，更是保障科研数据真实可靠的基石。