全自动氨基酸分析仪使用步骤

核心原理与前处理关键控制点

全自动氨基酸分析仪（AAA）作为生命科学、食品检测及临床医疗领域的核心设备，其主流工艺依然基于经典的人柱后衍生离子交换色谱法。其基本流程是将酸化或游离后的氨基酸注入阳离子交换树脂色谱柱，通过不同浓度的缓冲液进行梯度洗脱，再与茚三酮（Ninhydrin）试剂在高温反应器中发生显色反应，在570nm和440nm波长下进行光度检测。

在实际操作中，前处理的精细程度直接决定了终数据的平行性。对于蛋白类样本，通常采用6mol/L的盐酸在110℃恒温环境下水解22-24小时。需特别注意，含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）在酸水解过程中极易氧化，需预先进行过甲酸氧化处理；而色氨酸则需采用碱水解法以防止降解。

全自动氨基酸分析仪标准化操作流程

1. 试剂准备与系统平衡

开机前，应确认缓冲液（Buffer）和茚三酮衍生液的剩余量。缓冲液的pH值精确度需达到±0.01，任何微小的pH偏差都会导致保留时间的剧烈漂移。

• 排气处理：开启泵前，确保管路中无气泡。
• 基线稳定：启动系统平衡程序，通常需运行一个完整的洗脱周期，观察压力波动是否在±1%以内。

2. 标准品配制与校准

建立准确的回归方程是定量分析的基础。建议使用高纯度氨基酸混合标准溶液，并根据样本浓度区间设定3-5个梯度。

• 内标法应用：为补偿进样量误差，建议加入正亮氨酸（Norleucine）作为内标。

3. 进样与程序设定

将处理好并通过0.22μm微孔滤膜的样品置于自动进样盘。在软件端设定洗脱梯度程序（包括泵流速、反应器温度、柱温梯度等）。

关键运行参数参考列表

在操作者的日常维护中，以下参数是监控仪器健康状态的核心指标：

过程监控与质量控制

在分析过程中，需关注“峰分离度（Resolution）”。例如，苏氨酸（Thr）与丝氨酸（Ser）之间的分离度应不低于1.2。若发现峰形拖尾，往往提示色谱柱受到了重金属离子或脂类物质的污染，此时需使用再生液进行柱活化。

对于高通量检测实验室，建议每隔10个样本插入一个中间浓度标准品进行核查。若测得值漂移超过±3%，则需重新进行系统校准。

数据处理与系统关机

分析完成后，通过集成软件进行积分处理。从业者会手动复核每一处积分基线，特别是对于低含量的组分，自动积分可能存在误判。 关机前，必须执行系统清洗程序（Wash Sequence），使用专用的清洗液冲洗柱头、管道及反应器，防止茚三酮在高温下结晶阻塞毛细管。

全自动氨基酸分析仪的维护是一项精细活，保持实验室环境温度恒定（通常建议20-25℃）以及电源电压的稳定，是延长分光光度计光源寿命和色谱柱寿命的隐形关键。