免疫印迹主要试剂

Western免疫印迹（WesternBlot）是往膜上转移蛋白质，然后利用抗体进行检测。可通过融合部分的抗体对新基因的表达产物进行检测。可用相应抗体作为一抗对已知表达蛋白进行检测。

主要试剂

1、5%(w/v)脱脂奶粉。

2、在磷酸缓冲盐溶液(PBS)中溶解NaN30.02%叠氮钠(有毒，戴手套操作)。

3、Tris缓冲盐溶液(TBS):

NaCl 500mmol/L，Tris/HCL(pH7.5)20mmol/L。

4、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。

5、过氧化物酶标记的第二抗体。

6、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。

7、BCIP(溶于1**%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。

8、Tris-HCL(pH9.5)100mmol/L。

9、NaCl100mmol/L。

10、EDTA5mmol/L，Tris-HCL(pH7.5)50mmol/L。

11、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺：

含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液的配制应当使用温热（对溶解双丙稀酰胺有利）的去离子水。取1gN，N-亚甲叉双丙稀酰胺，29g丙稀酰胺，将水加入到100毫升。将其在棕色瓶中，4℃避光保存。由于碱催化或者光催化会发生脱氨基反应，因此必须确保PH不高于7.0。如果出现沉淀，可以过滤，若使用期超过两个月，就必须重新配制。

12.十二烷基硫酸钠SDS溶液:

10%(w/v)0.1gSDS使用1mlH2O去离子水配制，在室温下保存。

13、分离胶缓冲液:

48ml 1mol/LHCL和1.5mmol/L Tris-HCL(pH8.8): 18.15g Tris混合，加水稀释，使终体积到100ml，过滤后在40摄氏度下保存。

14、浓缩胶缓冲液:

在40ml H2O中溶解0.5mmol/L Tris-HCL(pH6.8):6.05g Tris，使用大约48ml 1mol/LHCL将pH调至6.8，加水稀释，使终体积到100ml，过滤后在40摄氏度下保存。必须使用Tris碱来制备

这两种缓冲液，然后使用HCL来对PH值进行调节。

15、TEMED原溶液：

过硫酸铵在N，N，N’N’四甲基乙二胺的催化作用下使自由基形成，从而使得两种丙稀酰胺加速聚合。若PH太低，则会YZ聚合反应。丙稀酰胺聚合所必须的两种自由基由10%(w/v)过硫酸胺溶液来提供。临用前配制数毫升去离子水。

16、SDS-PAGE加样缓冲液:

1.6ml 0.05%溴酚蓝，3.2ml巯基乙醇，12.8ml 10%SDS，6.4ml甘油，8ml pH6.8 0.5mol/LTris缓冲液，加32ml水混匀备用。与蛋白质根据1:1或1:2比例混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，通常是20-25ul，总蛋白量100μg。

17、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:

10gSDS，188g甘氨酸，30.3gTris用蒸馏水溶解至1000ml，使0.25mol/L Tris-1.92mol/L 甘氨酸电极缓冲液得到。在临用前稀释10倍。

18、转移缓冲液：

对1L转移缓冲液进行配制，需要对0.37gSDS，5.8gTris碱以及2.9g甘氨酸进行称取，并且将200ml甲醇加入，加水至总量1L。

19、丽春红染液储存液：

30g磺基水杨酸，30g三lv乙酸以及2g丽春红S加水至100ml，使用时将上述储存液稀释10倍，就使成丽春红S使用液制成，在使用后将其废弃。