液相色谱仪常见问题处理

　　液相色谱仪被广泛用在了医学化工生物等领域，这种色谱仪正发挥着越来越重要的作用。当然，在使用液相色谱仪时会遇到很多的问题，那么液相色谱仪常见问题怎么处理呢?

　　1、气泡溢出

　　现象：液相色谱仪流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。

　　原因：液相色谱仪过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。

　　处理：液相色谱仪过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开液相色谱仪泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。

　　2、柱压高原因

　　原因：①缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;②样品污染沉积。

　　处理：对于diyi种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗液相色谱仪柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗液相色谱仪柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，Z后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

　　3、既无压力指示，又无液体流过

　　原因：①泵密封垫圈磨损;②大量气泡进入泵体。

　　处理：对于diyi种情况，更换密封垫圈;对于第二种情况，在液相色谱仪泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

　　4、压力波动大，流量不稳定

　　原因：系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。

　　处理：液相色谱仪工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

　　5、出峰不佳，峰分叉

　　原因：①色谱柱被污染;②柱头填料塌陷。

　　处理：对于diyi种情况，先用纯水反向冲洗液相色谱仪柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，Z后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。液相色谱仪柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。

　　6、峰面积重复性不佳

　　原因：①进样阀漏液;②加样针不到位;③液量不足。

　　处理：对于diyi种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。

　　日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完液相色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。