荧光定量基因扩增仪

　　荧光定量基因扩增仪的PCR扩增原理和普通基因扩增仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记，使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。该仪器主要用于医学临床检测，生物医药研发，食品行业，科研院校等机构。

荧光定量基因扩增仪的原理

　　标记有荧光素的TaqMan探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的TaqMan探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得CT值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

荧光定量基因扩增仪与普通基因扩增仪的区别

　　荧光定量基因扩增仪比普通基因扩增仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

　　荧光定量基因扩增仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的，而普通基因扩增仪是做定性分析和扩增基因片段，荧光定量基因扩增仪可以做普通基因扩增仪的工作，而反之就不行了，况且这样代价太大了，一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的功能不能互相取代。

　　普通基因扩增仪只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多，而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果，还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病，品种分子标记筛选，甚至亲自鉴定等都可以由普通基因扩增仪完成。

　　但是，某些需要定量的实验就必须用到实时定量基因扩增仪了。比如检测某些病原物的数量(血液乙肝病毒复制程度)，特定基因的表达量(比如结合反转录做的RNA定量分析)，某些基因在染色体组中拷贝数等等。荧光定量基因扩增仪一般不需要对扩增产物进行电泳分析，操作相对简单些，但是耗材实在是贵。

　　简单来说，普通基因扩增仪只能扩增，不能检测，便宜。荧光定量基因扩增仪除了扩增，还能在扩增的同时检测DNA发出的荧光信号，试剂和仪器都更贵。

荧光化学物质

　　荧光定量基因扩增仪所使用的荧光物质可分为：荧光探针和荧光染料。其原理简述如下：

　　1、荧光探针：

　　PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。

　　PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

　　荧光探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变，有望成为基因诊断和个体化用药分析的shou选技术平台。

　　2、荧光染料：

　　在PCR反应体系中，加入过量荧光染料，荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光染料仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。

　　3、分子信标：

　　是一种在5'和3'末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。

荧光定量基因扩增仪的应用

　　荧光定量基因扩增仪适用于临床及科研以聚合酶链式反应为特征的、以实时荧光定量检测分析DNA/RNA为目的的病原体检测及基因分析。

　　临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和LX评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断。

　　动物疾病检测：禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。

　　食品安全：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。

　　科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。

　　应用行业：各级各类YL机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。

　　由于荧光定量基因扩增仪是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。