液相色谱自动进样器校准规程

液相色谱自动进样器校准规程

在精密分析领域，液相色谱（HPLC）自动进样器扮演着至关重要的角色。其准确性直接关系到实验数据的可靠性与可重复性。定期的校准是确保自动进样器性能稳定、数据的关键环节。本文将针对实验室、科研、检测及工业等行业的从业者，分享一套系统性的液相色谱自动进样器校准规程，旨在提升分析效率与数据质量。

自动进样器校准的重要性

自动进样器作为HPLC系统中自动化程度高的部件之一，其主要功能是精确、稳定地将样品注入色谱柱。其校准内容主要聚焦于以下几个核心性能指标：

• 进样精度（Injection Precision）: 指连续多次进样时，实际进样体积与设定体积的偏差程度。
• 进样线性（Injection Linearity）: 指在一定体积范围内，进样体积与实际进样量之间的关系是否呈线性。
• 残留量（Carryover）: 指一次进样后，上一针样品残留物对下一针样品分析造成的影响程度。
• 进样延迟（Injection Delay Volume）: 指从进样指令发出到样品真正进入色谱柱之间的时间或体积差，这会影响峰形和分离度。

校准所需仪器与试剂

在进行自动进样器校准前，需准备以下物品：

• 已校准的分析天平: 精度要求至少达到0.01 mg。
• 高精度移液器: 至少包含0.5-10 µL、10-100 µL、100-1000 µL等规格，并确保其已通过校准。
• 容量瓶: 精度等级为A级，规格包括10 mL、50 mL、100 mL。
• 超纯水（Milli-Q等级）: 作为溶剂。
• 高纯度溶质: 如分析纯级的苯甲酸钠、丙酮等。
• HPLC级溶剂: 如乙腈、甲醇等，用于流动相。
• HPLC系统: 包括泵、检测器（如UV/Vis检测器）等，确保其工作状态正常。
• 色谱柱: 确保其已平衡好，并与分析方法匹配。

校准规程详解

1. 进样精度校准

目标: 评估连续进样体积的重现性。

步骤:

1. 准备样品: 配制浓度适宜的单组分溶液，如1 mg/mL的苯甲酸钠溶液。
2. 设定参数: 在自动进样器软件中，设定进样体积，例如10 µL。
3. 执行进样: 选择“重复进样”模式，连续进样20次。
4. 数据分析:
   • 记录每次进样的峰面积。
   • 计算峰面积的相对标准偏差（RSD）。
   • 标准: RSD应小于1.0%（对于10 µL及以上进样体积）。
   
   

计算公式:

RSD (%) = (标准偏差 / 平均值) × 100%

2. 进样线性校准

目标: 验证不同进样体积下的准确性。

步骤:

1. 准备样品: 如上，配制1 mg/mL的苯甲酸钠溶液。
2. 设定参数: 设定多个进样体积，例如2 µL, 5 µL, 10 µL, 20 µL, 50 µL。
3. 执行进样: 对于每个设定体积，连续进样5次，以提高数据的可靠性。
4. 数据分析:
   • 计算每个进样体积下的平均峰面积。
   • 绘制“进样体积（X轴）”与“平均峰面积（Y轴）”的散点图。
   • 进行线性回归分析，计算相关系数（R²）。
   • 标准: R²值应大于0.995。
   
   

3. 残留量校准

目标: 评估进样系统清洗效果。

步骤:

1. 进样高浓度样品: 进样一次高浓度的待测组分溶液（例如5 mg/mL的苯甲酸钠），记录峰面积。
2. 进样溶剂空白: 立即进样空白溶剂（超纯水），记录其峰面积。
3. 进样低浓度样品: 进样一次低浓度的待测组分溶液（例如0.1 mg/mL的苯甲酸钠），记录峰面积。
4. 数据分析:
   • 计算残留百分比：
     • 残留量（%） = (低浓度样品峰面积 / 高浓度样品峰面积) × 100%
     
     
   • 标准: 对于大多数应用，残留量应小于0.1%。具体标准需根据方法要求确定。
   
   

4. 进样延迟校准（可选，但推荐）

目标: 评估进样体积的稳定性。

步骤:

1. 准备样品: 配置两种不同溶剂组成的混合溶液，例如，一种含有您要检测的组分，溶解在乙腈中；另一种是纯的乙腈。
2. 设定参数: 设定一个相对较大的进样体积，例如50 µL。
3. 执行进样: 采用梯度洗脱的流动相，当流动相比例达到一定程度时，进样。
4. 数据分析:
   • 观察您要检测的组分峰的起始位置。
   • 该方法主要依赖于对系统的了解和经验判断，更严谨的方法可能需要使用特殊的检测器（如示差折光检测器）或专门的测试软件进行。
   
   

校准频率与记录

• 频率: 自动进样器的校准建议每三个月进行一次，或者在更换关键部件（如密封圈、管路）后立即进行。对于要求极高精度的应用，可适当缩短校准周期。
• 记录: 每次校准的详细过程、使用的仪器、试剂、参数设置、原始数据、计算结果及判定标准都应完整记录，并存档。这些记录对于质量控制和问题追溯至关重要。

通过遵循上述规程，可以有效地对液相色谱自动进样器进行校准，确保其稳定可靠地运行，从而为科研和生产提供高质量、可信赖的分析数据。